人胶质瘤中Mage-D4的表达特性和免疫学特性研究

我们及他人的初步研究发现胶质瘤高表达Mage-D4mRNA，而许多正常组织低或不表达，显示Mage-D4具有潜在的临床应用前景。本课题拟深入做以下研究：（1）表达方面：从mRNA和蛋白质水平确认Mage-D4在正常组织表达的限制性，了解在不同病理类型胶质瘤中其蛋白质的分布和表达情况；用去甲基化试剂诱导胶质瘤细胞株，分析启动子DNA去甲基化与Mage-D4表达的关系。（2）免疫学方面：用Mage-D4全长、N端和C端截短重组蛋白检测手术前后不同时段的肿瘤患者血清和脑脊液，了解Mage-D4抗体的特异性、阳性率和临床意义，以及抗原决定簇的可能部位；用Mage-D4真核重组表达（或病毒）载体转染抗原提呈细胞（DC），或/和重组蛋白孵育其DC，在体外诱导产生相应的细胞毒性Ｔ淋巴细胞（CTL），观察CTL对肿瘤细胞的杀伤作用。该课题的完成可综合评估Mage-D4用于胶质瘤免疫治疗和辅助诊断的可能性。

对Mage-D4的研究有以下发现：（1）Mage-D4呈限制性低表达于在正常组织，高表达于胶质瘤中；Mage-D4蛋白定位于胶质瘤细胞的胞浆或/和胞核；Mage-D4的表达与胶质瘤临床病理参数无关。（2）在正常组织、非肿瘤脑组织和胶质瘤组织存在Mage-D4剪切异构体两种形式（Mage-D4ab-c和Mage-D4ab+c）；其中胶质瘤组织中Mage-D4ab-c的表达率明显高于脑组织；Mage-D4剪切异构体表达与胶质瘤临床病理参数无关。（3）胶质瘤细胞株Mage-D4启动子呈低甲基化，甲基化频率与Mage-D4表达呈负相关；用5-AZA-CdR诱导胶质瘤细胞株SHG44和A172后，SHG44中Mage-D4启动子的甲基化频率明显下降，其mRNA的表达水平明显升高, 5-AZA-CdR对A172无作用。（4）胶质瘤患者血清中存在针对Mage-D4的抗体，其阳性率为18%，而正常人血清均为阴性；血清抗体的出现与胶质瘤患者临床病理参数无关。（5）用Mage-D4蛋白致敏的DC诱导CTL，体外实验发现这些CTL能特异性杀伤Mage-D4阳性的胶质瘤细胞株。上述结果提示，Mage-D4能在胶质瘤中特异性的表达并引起免疫反应，将其用于胶质瘤免疫治疗具有潜在的应用开发前景。