基于生物复合钛网支架的种植体周类牙周膜-类牙骨质诱导再生研究

目前，骨结合仍是牙种植成功的金标准。然而骨结合仍存在诸多缺陷，形成具有牙周膜结构的钛种植体-类牙周膜结合成已为新的研究领域。本课题组认为，HAP-EMPs-Matrigel包被的钛网（TW）是一种良好的生物复合支架，可用以诱导牙周膜纤维细胞（PDLFs）在种植体周形成类牙周韧带、类牙骨质。本课题组拟采用"分层装配"技术，将PDLFs分批接种到包被有HAP、EMPs和基底膜基质（Matrigel）的TW支架不同界面，通过体外培养和（或）体内孵育形成种植体周的类牙周膜-类牙骨质层；还将采用细胞学、免疫学、分子生物学、材料学和电子扫描/透射显微镜的方法，研究PDLFs在体外培养环境及体内受复合TW支架诱导的效应，并探讨其对类牙周膜-牙骨质的诱导机制。课题组前期已完成HAP-TW种植体骨整合实验，并在PDLFs与HAP-TW体外共培养中获得胶原纤维和类牙骨质沉积的结果，为深入研究提供了坚实的基础。

(一）体外实验完成情况.1、已成功完成人牙周膜成纤维细胞(human Periodontal Fibroblastls，hPDLFs)的原代培养、纯化及鉴定，并证明经培养的牙周膜成纤维细胞具有向硬组织分化的能力..2、骨形成蛋白-2（Bone Morphogenetic Protein-2，BMP-2）对hPDLFs体外的定向诱导分化作用：实验证明BMP-2对hPDLFs有明显成牙骨质及成纤维方向诱导作用，牙骨质附着蛋白在第七天时表达量较第五天及第三天高，I型胶原蛋白在第五天时表达量最高。.3、不同浓度釉基质蛋白（Endogain，EMD）对hPDLFs的定向诱导分化作用：100mg/L的釉基质蛋白对hPDLFs有明显的成牙骨质诱导作用，且第七天较第三天表达增加。.4、HAP钛网对hPDLFs生物学行为的影响：牙周膜成纤维附着TW 后细胞增殖的幅度较单独二维培养有所增加。.（二）体内实验的完成情况.将接种有hPDLFs的HAP钛网支架植入裸鼠皮下，分6周、12周取出钛网，行硬组织切片，甲苯胺蓝硬组织特异性染色，观察类牙周结构再生情况。结果可见实验组6周、12周甲苯胺蓝染色均阳性，12周更甚；实验组标本切片后可见类似胶原纤维缠绕钛丝..（三）存在的问题、建议.1、未建立有效的缓释系统，今后尝试对微球载体、凝胶载体、肝素等不同的缓释载体进行尝试，期望能找到并完成一个能包被于HAP-TW支架表面的EMPs缓释方式。.2、PDLFs无法接种于钛网内部，只能由钛网外侧爬行长入，可能无法形成最初设想的牙骨质、牙周膜分层装配最终形成有序的牙周系统，但HAP-EMPs -BMP-2-TW对爬入的PDLFs有明显的成牙骨质和牙周膜方向的诱导分化作用，仍为今后的实验提供了方向，奠定了基础。