板蓝根汤剂呈黑褐色物质（美拉德反应产物）的抗病毒作用研究

本研究旨在通过阐明板蓝根汤剂美拉德反应的产物的抗病毒作用及其机理，求证中药炮制、制剂过程中产生的黑色物质是中药汤剂重要的药效成分的新假说。.首先在不同美拉德反应条件下制备板蓝根蛋白美拉德反应产物，通过MDCK细胞培养法和鸡胚培养法确认和筛选其抗流感病毒的活性成份。通过亲和沉降和液相色谱技术等方法对这些活性美拉德反应产物进行分离，进而用免疫学和质谱方法进行结构鉴定和表征。同时应用流感模型小鼠验证其体内抗病毒活性，并用放射性或荧光标记示踪法研究其体内分布及代谢情况。.本研究将首次证明中药从采收后的干制，到炮制、制剂过程中产生的美拉德反应产物这类化合物具有生理活性和药理作用，是一类具有全新作用机理的药物分子，为中药开发乃至创新药物研发开辟崭新的领域。

1. 本课题首次从美拉德反应角度研究板蓝根抗病毒活性成分，发现并确认了美拉德反应产物为板蓝根汤剂中不可或缺的抗病毒活性成分，并通过改变反应条件，制备了一些列不同的美拉德反应产物；.2. 通过控制美拉德反应进程，制备一些列不同板蓝根MRPs提取物，并筛选获得具有较好体外抗病毒活性的板蓝根美拉德反应产物提取物（60℃，85% RH放置7天板蓝根提取物），其抗病毒活性显著优于新鲜板蓝根和板蓝根饮片提取物；.3. 通过小鼠实验，对上述具有显著体外抗病毒活性的板蓝根美拉德反应产物进行体内抗病害活性评价，肺部病变和肺指数结果表明此板蓝根美拉德反应产物具有一定的体内抗病毒作用，但整体结果不够显著。.4. 利用中子衍射、膜天平等分析手段，证实了板蓝根MRPs，在体外可结合到人工构建磷脂双层膜的磷脂双分子中间，改变膜的相关性质，阻止病毒对膜的侵染，从而起到抗病毒作用；.4. 利用常规色谱分离手段，分别从新鲜板蓝根和板蓝根饮片中分离得到了2个参与美拉德反应的蛋白组分及其对应的非酶促糖基化蛋白产物，并对其基本理化性质进行了表征；.5. 利用LC-MS技术，初步分析并确认了5个上述分离所得非酶促糖基化蛋白的糖基化位点及糖基化类型和产物。.本研究通过控制不同的温度、湿度及反应时间等热加工条件，获得不同板蓝根美拉德反应产物，确认板蓝根汤剂中美拉德反应产物具有抗病毒作用，论证了板蓝根的炮制和煎煮过程会影响板蓝根的抗病毒活性。这说明控制炮制、制剂条件来提高中药材的药物活性具有可行性。.从美拉德反应角度，研究中草药的生物活性，国内外相关研究几乎为空白，为完全独创性研究。本课题首次将中草药炮制过程发生的最重要化学反应与最终成型汤剂的生物活性联系起来，解决了单纯的植物化学角度对中草药药效物质研究的局限性，突破常规，以最简单的生物学假设出发，并最终取得喜人结果。此研究，对中草药的药效物质的分析具有重要的指导意义，同时也为诸多基于中草药的市售中成药产品提供了新的质控指标，其所产生的新的产品加工工艺，可获得现有工艺所难达到的具有更高药效的中药产品，并降低生产成本，必将创造巨大经济效益。