治疗银屑病的新型小RNA 药物的筛选及药理学研究

小RNA,尤其是siRNA以其对靶点作用的高效专一选择性和低毒性成为目前基因治疗中的一种特别具有吸引力的新方法。然而基因治疗中如何把核酸药物有效传递到病变组织中仍是基因治疗技术的关键瓶径。本项目以银屑病为药物筛选研究的目标，通过（1）筛选以MSK1, MSK2,CREB1等p38 MAPK 通路的基因为潜在靶点的高效小RNA，研究靶基因的沉默对银屑病治疗的相关靶标的调控作用，验证这些靶基因作为银屑病治疗的分子靶标的合理性，（2）建立并进一步完善具有自主知识产权的小RNA传递系统，系统评价新系统的稳定性和对基因药物的传递效率，改善其性能；（3）建立以银屑病动物模型为基础的基因药物的透皮给药模型，探讨针对小RNA的透皮给药的效率，评价透皮给药的毒性，研究透皮给药对银屑病相关致病基因的调控作用，尝试基因治疗对银屑病治疗的可行性，并为其它疾病的基因治疗提供有效的药物传递系统探索经验。

RNAi制药技术为现代药物研发提供了一种有别于传统新药研发的革命性技术，其主要困难在于如何有效地将RNAi药物传递到药物的作用靶标。银屑病是我国皮肤病中的一种重要疾病，虽然现代生物制药技术的临床应用表明针对TNFalpha的单克隆抗体等抗体药物具有显著的疗效，但是毒副作用也比较显著。RNAi制药技术的发展为研发新型的治疗银屑病药物提供了机遇和可能。为了克服小RNA药物传递过程中药物分子难于进入细胞，易于被降解的困难，本项目选取皮肤性疾病——银屑病为研究对象，通过筛选、优化细胞渗透肽的结构，配方，将针对于银屑病病理相关的合成小RNA分子，导入到一种新型的化学药物诱导的银屑病小鼠动物模型中，研究小RNA分子对银屑病动物模型的治疗作用。主要结果有，1. 合成、筛选出对转录因子CREB1有沉默效应的小RNA 分子，发现沉默此基因后，HaCAT细胞中与银屑病相关的细胞因子IL-1,IL-6以及TNFalpha的表达有一定程度的下降;通过芯片技术鉴定了和CREB表达相关的蛋白，与银屑病有一定的关系。2.筛选出多条对小RNA具有高效低毒的传递作用的多肽，尤其是筛选出对活体鼠皮具有传递小RNA功能的活性多肽，研究了多肽与小RNA形成包裹复合物的结构特征，发现多肽与小RNA形成的复合物颗粒分布主要在纳米颗粒的范围。研究了化学修饰多肽体内传递小RNA的分布特征，发现皮组织中也有显著的分布，提示采用该传递系统有可能实现对小RNA的体内给药。3. 小RNA-多肽复合物的小鼠银屑病模型的治疗作用表明，给药组能够有效缓解模型鼠皮病变皮肤的表皮增厚程度，改善皮肤的角质化，促进病变皮肤的毛发生长，且没有明显的毒副作。本研究的结果表明，小RNA的透皮给药是一种比较可行的治疗皮肤病的方法，在本研究中筛选到的小RNA结构，对治疗银屑病具对治疗银屑病具有一定的作用，说明通过沉默调控TNFalpha的转录因子，是开发新型生物药物的 一种可行途径。