含卷曲螺旋域8基因（CCDC8）在乳腺癌中的功能及其调控机制的研究

CCDC8 is a novel gene published in 2009. Within different species even from very low level to human being, the sequence of this gene shares very high identity. This suggests that this kind of gene is more likely to have very basic and important biological funcition . Since 2011, we have done some subcoloning and gene mutation of CCDC8; by affinity purification protein analysis and mass spectrometry analysis of CCDC8 gene, we screened three candidate genes(ie.LKB1,14-3-3,ANKRA2)which have theoretically strong relationship with CCDC8 gene in breast cancer , we also got some idea of the function domain of CCDC8 。 These results inspired us to do further research. This subject is trying to confirm the function of the CCDC8 gene, And through the animal experiment, the CCDC8 gene expression and regulation in breast cancer animal models will also be studied by inverstigating of the tumor formation and matstasis，to study the interaction with candidate genes and the molecular mechanism. Through the above study , we can more fully understand the the function and regulation mechanism of CCDC8 gene in breast cancer, this will help to prevent the happening of breast cancer and provide some valuable reference for the experiment of new targeting drug development.

含卷曲螺旋域8基因（CCDC8）是2009年才确认公布的基因。在进化跨度很大的不同物种中，该基因序列具有高度的同一性，提示它所承载的功能可能是生物体最基本而且很重要的功能。 2011年以来，我们完成了该基因的分段克隆和点突变。通过亲和纯化蛋白分析和质谱分析，筛选出在乳腺癌中可能与CCDC8功能调控相关的候选基因：LKB1、14-3-3、ANKRA2。预实验初步证实了CCDC8与乳腺癌有相关性，发现了ccdc8的功能区段。本课题拟用动物实验对比研究敲除CCDC8基因与未敲除CCDC8基因的小鼠接种乳腺癌细胞后成瘤和转移情况，证实它与乳腺癌发生发展的相关性；以LKB1、14-3-3、ANKRA2为候选基因研究对CCDC8功能调控的分子机制。 通过上述研究，揭示CCDC8基因在乳腺癌中的功能和调控机制，为乳腺癌的病因预防和新靶点药物开发提供有价值的实验参考。

CCDC8是一个2009年才确认公布的基因。在进化跨度很大的不同物种中，该基因序列具有高度的同一性，提示它所承载的功能可能是生物体最基本而且很重要的功能。2011年以来，在多伦多大学和麦吉尔大学的帮助下，完成了该基因的分段克隆和点突变。通过亲和纯化蛋白分析和质谱分析，筛选出在乳腺癌中可能与CCDC8功能调控相关的三个候选基因：LKB1、14-3-3、ANKRA2。预实验初步证实了CCDC8与乳腺癌的相关性，发现了ccdc8的功能区段和ANKRA2与之的结合位点。. 本课题病理检测CCDC8在乳腺癌不同分期、不同分子分型中的表达，分析其差异。结果显示，CCDC8基因在乳腺癌、癌旁、良性肿瘤、正常组织中的表达有差异，在乳腺癌组织中，CCDC8基因表达水平与nm23呈负相关性；从分子生物学水平，研究候选基因对CCDC8功能的调控，发现LKB1、14-3-3、ANKRA2基因之间的关系：14-3-3和ANKRA2都可以分别竞争性地结合到组蛋白去乙酰化酶4（HDAC4）的PxLPxl/L功能区，该区段内丝氨酸350位点通过磷酸化状态的双向调控将决定14-3-3和ANKRA2二者孰与HDAC4结合，从而调控组蛋白去乙酰化酶在细胞生理和病理方面的功能；而在磷酸化状态的双向调控过程中，LKB1基因发挥着关键性的作用。它通过调控组蛋白去乙酰化酶II家族中的HDAC4/5/7/9在细胞核内外的转运，进而与SIK2、SIK3等形成信号通路，决定了组蛋白去乙酰化酶II的磷酸化状态。通过对CCDC8基因实施点突变和免疫共沉淀分析（CO-IP），发现ANKRA2在CCDC8基因上的的调控结合位点为C末端PxLPxL功能区段P503A。通过动物实验，证实了三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231经CCDC8基因沉默后其细胞增殖能力减低、细胞凋亡率增加，CCDC8基因沉默可以抑制裸鼠乳腺癌移植瘤的生长。. 通过这三层面的研究，初步认识了CCDC8在乳腺癌中的功能和调控机制，为乳腺癌的病因预防和新靶点药物开发提供了有价值的参考。