农抗120产生菌吸水刺孢链霉菌生物合成酶基因克隆研究

本项目按研究计划方法用已知探针基因嘌呤雷素乙酰转移酶基因从农抗120产生菌总体DNA中未检测到有相关基因。改用转座子实变技术以求得到农抗120生物合成阻断变株，再克隆相关基因。首先建立起了120产生菌的基因克隆系统，通过pUC1169和PCZA168多次转化120原生质体，都无法得到转化子，明确了农抗120产生菌对外源DNA有很强的限制性修饰作用，致使研究停滞不前。再通过高温（50℃）和低温（-70℃）处理原生质体后，用PCZA168转化得到4株转化子；再用Tn5096转座所得到的转化子，得到110株转座子，对这些转座子进行抗性测定和纯化，得到168株菌株，分株进行推瓶发醇，测定效价，明确有2株是农抗120转座生物合成阻断变株，有2株是效价提高50%以上的高产菌株。