基于肠道靶向给药的pH依赖型微胶囊的研制及其作用机理研究

研究pH依赖型微胶囊的制备技术和作用机制。以酸沉大豆分离蛋白为内层壁材，壳聚糖分子作为中间层，高甲氧基果胶作为表层成分，制备pH依赖型三明治式微胶囊，通过摸索溶液的pH值、反应温度，反应时间等探讨微胶囊的最佳制备条件；利用透射电镜、X-衍射、红外光谱、热重分析等技术对微胶囊进行结构表征。以乳酸菌细胞壁多糖作为模型药物，在模拟胃液和模拟肠液中评价微胶囊的降解行为以及微胶囊的靶向给药能力。体内试验通过免疫组化方法分析微胶囊与胃肠道粘膜的作用机制；采用荧光标记技术评价微胶囊降解对细胞连接和细胞通透性的的影响，通过测定血液中细胞因子的动态变化间接反映微胶囊的靶向释药能力。.该研究首次利用大豆分离蛋白与壳聚糖和高甲氧基果胶复合研制肠道靶向微胶囊，为阐明微胶囊对肠粘膜的作用机制以及利用该微胶囊包封生物活性分子用于肠道靶向给药提供理论基础和载体材料。

益生菌及其活性成分制剂对人体肠道的益生功效以及调节机体免疫功能的研究已成为现今改善人类健康水平的重要途径。在国家自然科学基金（项目编号为：NSFC31000773）的资助下，本研究主要进行了以下两部分工作，一是德氏乳杆菌微胶囊的制备条件摸索及其功能性评价；二是肽聚糖微球的研制及其对机体免疫调节功能的研究。.第一部分工作：以大豆分离蛋白（SPI）和高甲氧基果胶（HMP）作为微胶囊壁材，利用复凝聚法制备德氏乳杆菌微胶囊，冷冻干燥后得含菌量（10.87±0.13）lg cfu/g，冻干存活率（68.55±13.39）%，经过模拟人体胃肠道实验处理后，菌体浓度下降约2个数量级，微胶囊对菌体有一定的保护作用。德氏乳杆菌微胶囊对盐酸林可霉素致小鼠肠道菌群失调模型双歧杆菌数量明显增加。微胶囊组SlgA含量明显高于裸菌组（P＜0.05）；同时两治疗组小鼠的小肠病理损害明显得到恢复，而自然恢复组则不明显。.第二部分工作：以物乳杆菌作为试验菌株，采用改良的三氯乙酸法从该菌株中分离提取肽聚糖，并对肽聚糖提取物进行了结构鉴定及理化分析。以壳聚糖为壁材将提取的肽聚糖进行微球化，并通过动物实验研究口服微球化的肽聚糖的缓释效果。载肽聚糖的壳聚糖微球具有显著的缓释效果，能够显著延长肽聚糖作用时间。肽聚糖微球能够增强机体免疫的能力。肽聚糖-壳聚糖复合微球组在第14d时小鼠IgG含量有明显提高，在第21d时变化显著(p＜0.01)。肽聚糖微球组在第21d，28d感染铜绿假单胞菌时，存活率分别为50%，60%，与空白组相比有显著差异。.本课题组共发表论文9篇，其中SCI收录4篇，EI 收录1篇；获得国家技术发明专利3项；黑龙江省科技进步二等奖1项，黑龙江省畜牧兽医科技进步一等奖1项，哈尔滨市科技进步二等奖1项；出版学术专著1部。参加国内及国际学术会议3次，在国际会议上作大会分组报告2次，国内会议上作大会分组报告1次；培养硕士研究生8名，已毕业4名。.经过三年的工作，本项目取得了丰硕的成果，超额完成了资助计划书的内容。