膈下逐瘀汤干预循环miRNA治疗非酒精性脂肪性肝纤维化的机制研究

Research group hypothesized that miR - 24 is a new type of hepatic vascular endothelial cell dysfunction specific biological markers, Gexiazhuyu decoction can through effective intervention under miR - 24 specific target genes channel to correct the disorder & damage of blood vessel function and prevent & treat nonalcoholic fatty liver fibrosis .By studying nonalcoholic fatty liver fibrosis in rats model given Gexiazhuyu decoction,research group provides the model animal plasma miR - 24 expression, the metabolic syndrome indicators (FBG, Ins, TC, TG, FFA, HDL-c, LDL-c, Apo, HbA1c), hepatic fibrosis indexes, vascular endothelial cell lipid oxidative damage index, ET - 1, vWF, sVCAM -1, sICAM-1 and correlation analysis.Hepatic vascular tissue change of optical microscope and FIVE (1) , the ultrastructural changes of endothelial cells, TRPM4 protein expression and distribution and the change of the mRNA.Research group explain the principle of Gexiazhuyu decoction prevent and treat nonalcoholic fatty liver fibrosis from experimental medicine perspective.

本课题提出“miR-24是肝脏血管内皮细胞功能障碍的新型特异性生物学标记物，膈下逐瘀汤能够通过有效干预miR-24调控特定靶基因通道纠正血管功能的紊乱和损伤及防治非酒精性脂肪性肝纤维化“的假说。课题组通过研究膈下逐瘀汤给药的非酒精性脂肪性肝纤维化大鼠模型，提供模型动物血浆miR-24 表达，代谢综合征指标（FBG、Ins、TC、TG、FFA、HDL-c、LDL-c、Apo、HbA1c），肝纤四项，血管内皮细胞脂质氧化损伤指标、ET-1、vWF、sVCAM-1、sICAM-1 等参数的改变和相关性分析。肝血管组织的光镜和FIVE（1）荧光改变、血管内皮细胞的超微结构改变、TRPM4 的表达与分布情况、内皮细胞靶蛋白（TRPM4）及mRNA变化情况，等一系列重要基础研究数据。从实验医学角度阐明膈下逐瘀汤抗非酒精性脂肪性肝纤维化的机理，丰富活血化瘀法治疗非酒精性脂肪性肝纤维化的理论实践。

项目的背景：本项目在国家自然科学基金（NO.81603418）资助下完成了申请书所述的各项内容。主要研究内容：主要研究了中医传统经典名方膈下逐瘀汤抗非酒精性脂肪性肝纤维化的机理，并证实课题提出的“miR-24是肝脏血管内皮细胞功能障碍的新型特异性生物学标记物，膈下逐瘀汤能够通过有效干预miR-24调控特定靶基因通道纠正血管功能的紊乱和损伤及防治非酒精性脂肪性肝纤维化”的假说。重要结果与关键数据：在建立了膈下逐瘀汤给药的非酒精性脂肪性肝纤维化大鼠模型的基础上。从代谢综合征指标、肝纤四项，血管内皮细胞脂质氧化损伤指标等参数的改变和相关性分析，得到例如，肝脏TG、TC、TNF-α、IL-6 、MDA含量均升高，SOD 含量降低等重要数据变化；同时通过肝血管组织的光镜和FIVE（1）荧光改变、血管内皮细胞的超微结构改变，发现与造模组比较膈下逐瘀汤组干预后大鼠肝组织胶原面积显著减少；进而通过PCR和Western-blot等实验考察TRPM4 的表达与分布情况、内皮细胞靶蛋白及mi RNA24变化情况，得到miRNA24 表达水平明显上升，TRPM4 mRNA和蛋白表达水平下降，具有显著性差异结果，从而得出：膈下逐瘀汤能通过上调miRNA24的表达量抑制TRPM4 mRNA的表达减轻血管损伤，从而减轻了非酒精性脂肪性肝纤维化的肝脏细胞损伤。科学意义：本实验通过对膈下逐瘀汤抗非酒精性脂肪性肝纤维化的机制的现代医学研究，验证了提出的科学假说，丰富了活血化瘀法治疗非酒精性脂肪性肝纤维化的理论实践，为今后活血化瘀类中药在抗非酒精性脂肪性肝纤维化的研究提供了新的研究方向。