Cav-1调控肝细胞BSEP转运体在胆小管侧膜功能表达的分子机制

肝细胞胆小管侧膜胆汁酸盐输出泵(BSEP)转运功能下降,胆汁中胆汁酸盐减少是胆固醇结石形成的重要原因。BSEP在胆小管侧膜的功能表达受小窝蛋白(Cav－1)调节，但具体机制不清。我们在以往研究基础上提出Cav-1可能通过负性调控PKC活性，抑制BSEP连接区丝氨酸磷酸化，减少BSEP与HAX-1结合，避免HAX-1相关的网格蛋白依赖性胞吞作用，增强BSEP在胆小管侧膜的功能表达。本课题拟以Cav-1+/+、Cav-1-/-表达小鼠及pBSEP-EYFP、pQE-Hax共转染的HEK293细胞为研究平台，通过干预Cav-1表达、PKC活化，检测肝细胞胆小管侧膜Cav-1、BSEP、PKC、磷酸化PKC的表达及BSEP与HAX-1的共沉淀情况，观察BSEP胞吞过程及胆汁酸盐转运功能，探讨Cav-1调控BSEP在胆小管侧膜功能表达的分子机制，为寻找新的胆结石预防及治疗靶点提供理论与实验依据。

肝细胞胆小管侧膜胆汁酸盐输出泵(BSEP)转运功能下降,胆汁中胆汁酸盐减少是胆固醇结石形成的重要原因。BSEP在胆小管侧膜的功能表达受小窝蛋白(Cav－1)调节，但具体机制不清。我们在以往研究基础上提出Cav-1可能通过负性调控PKC活性，抑制BSEP连接区丝氨酸磷酸化，减少BSEP与HAX-1结合，避免HAX-1相关的网格蛋白依赖性胞吞作用，增强BSEP在胆小管侧膜的功能表达。本课题以Cav-1+/+、Cav-1-/-表达小鼠肝细胞及pBSEP-EYFP、pQE-Hax共转染的HEK293细胞为研究平台，通过干预Cav-1表达、PKC活化，检测肝细胞胆小管侧膜Cav-1、BSEP、PKC、磷酸化PKC的表达及BSEP与HAX-1的共沉淀情况，观察BSEP胞吞过程及胆汁酸盐转运功能，探讨Cav-1调控BSEP在胆小管侧膜功能表达的分子机制。结果提示饮食诱导的C57L小鼠胆囊胆固醇结石形成过程中，肝细胞胆小管侧膜BSEP表达下降，Cav-1表达增多；饮食诱导的C57L小鼠胆囊胆固醇结石形成过程中，肝细胞膜总PKC表达不变，而磷酸化的PKC表达增多；饮食诱导的C57L小鼠胆囊胆固醇结石形成过程中，HAX-1与BSEP的共表达增多；IRHCs中应用PKC激动剂预处理后，HAX-1与BSEP的共表达增多。