SND1与TGFβ通路交互调控对乳腺癌转移影响的研究

Metastasis is the leading cause of death in breast cancer patients. The previous work showed that SND1 expression level is related with breast cancer metastatic phenotype, the activation of TGFβ pathway up-regulate SND1 expression in breast cancer cells, SND1 could also up-regulate TGFβ pathway activity. According to these results, we propose the hypothesis that there is a positive feedback loop of SND1/TGFβ crosstalk regulation in breast cancer. The following parts are the central idea of this project: (1)understanding the relationship between SND1 over-expression and TGFβ pathway excessive activation in breast cancer cells, determining whether the SND1/TGFβ pathway positive feedback loop exists in breast cancer cells; (2)finding out the interaction sites and activation domain of the key functional proteins involved in the crosstalk process; (3)revealing the role of SND1/TGFβ pathway crosstalk dis-organization in breast cancer metastasis process. Through the research of this subject, we try to provide additional proof for the molecular mechanisms of breast cancer metastasis, we also hope we could provide more theoretical evidence for developing new technology of the diagnosis and treatment of metastatic breast cancer.

癌细胞转移是乳腺癌患者死亡的首要原因。前期工作发现乳腺癌SND1表达水平与其转移表型密切相关，激活TGFβ通路可上调乳腺癌细胞SND1表达，SND1又可上调TGFβ通路活性。据此我们提出乳腺癌细胞存在SND1/TGFβ通路异常交互性正反馈调控环路并促进乳腺癌转移的研究假说。本项目研究的中心思想是：(1)了解乳腺癌细胞过表达SND1与TGFβ通路过度激活的相互关系，确定乳腺癌细胞是否存在SND1与TGFβ通路的交互性正反馈调控环路；(2)找出在乳腺癌细胞中参与该异常调控环路信号传递过程的关键功能蛋白种类，明确它们的相互作用位点和作用方式，揭示SND1与TGFβ通路彼此上调的分子机制；(3)阐明乳腺癌SND1/TGFβ通路交互调控异常，对乳腺癌细胞转移的作用、作用地位及其作用的确切分子机制。旨在为最终阐明乳腺癌转移的分子机制提供重要线索，为研发乳腺癌转移诊疗新技术提供客观的依据。

（一）研究背景：在全球范围内，乳腺癌发病率居全身所有恶性肿瘤的第二位，在女性恶性肿瘤中发病率位居第一，目前对乳腺癌细胞转移是乳腺癌患者死亡的首要原因。因此，如何有效预防乳腺癌转移，一直是乳腺癌防治研究领域备受关注的重点。.前期工作发现乳腺癌SND1表达水平与其转移表型密切相关，激活TGFβ通路可上调乳腺癌细胞SND1表达，SND1又可上调TGFβ通路活性。据此我们提出乳腺癌细胞存在SND1/TGFβ通路异常交互性正反馈调控环路并促进乳腺癌转移的研究假说。SND1是乳腺癌转移的重要责任因子，其过表达是引起和（或）促进乳腺癌转移的重要因素，并极有可能成为防治乳腺癌转移的重要分子靶标。.（二）主要研究内容及目的.1.主要研究内容.（1）检测乳腺癌组织SND1与TGFβ通路成员蛋白表达的关联性：检测不同分期的乳腺癌组织标本中SND1 与TGFβ 通路信号传递蛋白的表达状况，分析它们之间的相互关系，并藉此评估SND1作为乳腺癌转移分子标志物的应用价值。.（2）研究乳腺癌细胞TGFβ通路调控SND1表达的确切分子机制：用荧光素酶报告基因和染色质免疫共沉淀实验法，检测SND1基因启动子区顺式作用元件的确切位置。.（3）研究SND1 经转录水平引起TGFβ通路过度激活的分子机制:用报告基因和ChIP 实验检测在Smad基因启动子区顺式作用元件的确切位置。寻找SND1上调Smad表达所需的具体结构域。.（4）研究SND1/TGFβ通路异常交互调控环路对乳腺癌转移的作用：用乳腺癌细胞系和转移动物模型为研究对象，通过体内外实验观察SND1 与TGFβ通路间异常正反馈交互调控环路对乳腺癌细胞侵袭迁移能力、上皮间质化等与转移相关细胞表型变化的影响。.2.研究目的.（1）评估SND1 作为潜在的乳腺癌转移分子标志的价值。.（2）阐明乳腺癌细胞中TGFβ 通路上调SND1表达的具体分子机制。.（3）阐明乳腺癌细胞中SND1 调控TGFβ 通路异常的分子机制。.（4）在上述分子机理的研究中筛选出起到关键作用的功能蛋白，为转移性乳腺癌的靶向治疗提供理论依据。.（三）重要结果及科学意义.（1）证实了SND1表达与乳腺癌转移的相关性，提示SND1可以作为乳腺癌转移的分子标志物，为乳腺癌的分子诊断提供了新的指标.（2）揭示了乳腺癌中TGFβ1通路通过转录激活SND1表达的分子机制，首次证实了SND1在乳腺