狗脊炮制品大极性抗骨质疏松成分分离与炮制原理的深入解析

前期研究发现：狗脊炮制后大极性部位化学成分变化与其功效改变有明确关系，且有很好的抗骨质疏松作用。所以，本课题拟深入研究狗脊大极性部位的化学成分及其炮制前后的变化。首先对前期研究有明显活性的大极性部位，采用指纹图谱法比较分析狗脊炮制品和生品的化学成分差异；采用色谱法，分离纯化炮制后产生的新成分和增量成分，结合光谱数据和理化性质鉴定其结构。通过新成分和增量成分的定性、定量分析，揭示狗脊大极性成分在炮制过程中的化学成分变化和变化机理。同时深入研究狗脊炮制过程中γ-吡喃酮类成分产生的影响因素，为炮制过程中糖类成分的转化过程和机理提供科学数据。依据狗脊的功效，开展狗脊制品大极性部位的增量成分和新成分的抗骨质疏松、抗衰老、抗氧化等药理学研究。结合前期研究结果，综合解析狗脊炮制原理。并根据炮制原理，进一步优化和修订前期建立的炮制工艺和质量标准。

本课题围绕研究目标，经过3年的认真研究，在狗脊炮制品的活性物质基础和作用机理方面均取得了突破性成果：. （1）首次发现狗脊炮制品大极性部位含有多种糖的端基异构化酚苷和苯丙素苷，其中两个是鞣质类新化合物，为狗脊活性物质基础的揭示提供了依据。. （2）采用凝胶过滤色谱、离子交换色谱等技术，对狗脊的多糖类成分进行分离纯化，获得了2个均一多糖。其单糖组成研究结果显示，2个均一多糖是由葡萄糖和甘露糖组成的。这一研究结果填补了以往对狗脊多糖成分研究的空白。. （3）采用ELISA和RT-PCR技术从分子角度研究狗脊炮制品抗骨质疏松的作用机理和作用靶点。提示狗脊炮制品大极性部位抗骨质疏松的途径是：①通过介导骨吸收和骨形成之间的耦联作用，使骨形成增加，促进骨重建的正常进行。②提高骨髓基质细胞向成骨细胞和成软骨细胞分化的诱导，促进骨形成。. （4）首次发现狗脊炮制后抗氧化活性增强，并且是狗脊炮制品的抗骨质疏松作用增强的机制之一。. （5）在梅拉德反应的基础上，又发现了狗脊炮制过程中Cibotiumbaroside A发生了苷键裂解反应，致使原儿茶酸含量增加。更深层地揭示了狗脊炮制过程中的复杂化学变化及其机理。. （6）首次采用HPLC、HPLC-QTOF-MS、TLC、NMR方法建立了生熟狗脊的指纹图谱，揭示了狗脊炮制前后主要变化的化学成分为糖类和酚酸类成分。. （7）证实了γ-吡喃酮与狗脊炮制工艺的温度和时间密切相关，通过活性筛选实验，揭示了炮制过程中产生的γ-吡喃酮类成分对狗脊炮制品功效的影响是通过抗氧化和直接作用骨细胞两个途径促进狗脊炮制品的抗骨质疏松作用的增强。.综上，狗脊的炮制原理可以概括为：狗脊炮制过程中糖和氨基酸类成分发生了梅拉德反应，产生多种γ-吡喃酮类成分；酚苷发生苷键断裂，原儿茶酸含量增加。从而使狗脊炮制品的抗氧化活性增强，并且促进成骨细胞和骨间充质干细胞增殖，上调骨组织BMP-2和IFG表达，增强了抗骨质疏松作用。.科学研究是没有穷尽的，狗脊炮制仍可继续研究。如：①狗脊炮制后还有那些新成分产生？②除了BMP-2狗脊还对哪些与骨质疏松症有关的蛋白有调节作用；③与生狗脊相比，制狗入复方后是否对复方的药效作用有明显影响？均需根据中医药理论，运用现代技术进行深入研究。