选择性抗肝癌先导化合物的小分子探针设计合成及其机理研究

我们发现的新型哒嗪酮类化合物具有优异的选择性抗肝癌肿瘤株活性、成药性好和低毒性，有发展成为一类新药的前景。通过细胞信号传导的生物学研究，不能确定它的可能作用靶点。本项目的申请基于活性分子设计合成高选择性的分子探针，将光亲和基团引入到哒嗪酮化合物分子中，同时仍然使其保持良好的选择性抗肝癌活性；通过化学生物学（ABPP）技术，使活性分子与作用靶标共价结合，然后再通过连接报告基团生物素将靶标蛋白富集、纯化和鉴别，或通过荧光素报告基团的连接来定量检测标记蛋白，同时可观察到小分子在细胞上的动态分布及作用位点，进而可望发现选择性抗肝癌的作用机制。本项目将为创新性选择抗肝癌靶标的发现和候选药物作用机制的阐明，打下坚实的基础。

我们发现的新型哒嗪酮类化合物具有优异的选择性抗肝癌活性、药代性质好和毒性低，有发展成为一类新药的前景。通过细胞信号传导的生物学研究，未能确定它的作用靶点。本项目采用原位标记的策略，在构效关系的基础上构建了两个光亲和探针分子库，共合成分子39个，其中合成一类光标记基团新结构。活性筛选获得了保持母体化合物选择性的活性探针分子Yhhu 4528（IC50：153nM），采用化学生物学技术（ABPP），利用Yhhu 4528进行靶标垂钓，由于靶蛋白丰度低，利用Strept-Avidin柱对靶蛋白进行纯化富集后，Western-Blotting中未获得有效靶蛋白。采用荧光标记的方法获得荧光探针分子库，共合成分子8个，其中发现一类基于BODIPY的新型off-on荧光探针分子，活性筛选获得了保持母体化合物选择性的活性探针分子Yhhu 4728（IC50：2711nM）。利用Yhhu 4728进行细胞内靶蛋白荧光定位，发现其在胞浆中富集。.虽然实验未获得预期结果，但积累了如何快速获得活性探针分子的经验，同时ABPP技术也逐渐成熟，为进一步的研究打下了基础。.