APL诊疗新靶点的筛选与研究

PML-RARα融合蛋白是急性早幼粒细胞白血病(APL)发生的关键因素，中性白细胞弹性蛋白酶(NE)可将PML-RARα裂解成52KDa的PML(NLS-)和61KDa的NLS-RARα两种变异蛋白，这两种蛋白在APL的发生中具有潜在的重要作用。而目前除了我们的研究外，国内外尚无相关的研究与报道。本课题拟在前期研究基础上，通过酵母双杂交技术，直接在活细胞内筛选与PML(NLS-)和NLS-RARα相互作用的靶蛋白；通过间接免疫荧光标记的激光共聚焦显微成像与免疫共沉淀(CO-IP)等技术在胞内外进行相互作用的验证；进一步运用生物信息学、分子生物学和细胞生物学的技术与方法，对筛选到的靶蛋白进行相应的生物学功能研究。本项目的研究成果将为深入探讨APL的分子发生机制，绘制新的PML-RARα融合蛋白的致病信号途径，并为探寻新的APL诊疗靶点与方法奠定实验与理论基础。

PML-RARα蛋白是APL发生的关键因素，NE可将PML-RARα裂解成PML（NLS-）和NLS-RARα两种变异蛋白。本项目以此为出发点，进行APL诊疗新靶点的筛选与研究。主要研究内容包括1）PML（NLS-）与NLS-RARα蛋白的细胞定位与生物学功能研究；2）PML（NLS-）与NLS-RARα相互作用蛋白的的活细胞内筛选；3）PML（NLS-）与NLS-RARα相互作用蛋白的胞内外验证；4）PML（NLS-）与NLS-RARα相互作用蛋白的细胞生物学功能分析；5）NE介导APL发生的机制分析与诊疗新靶点的探索。研究结果表明：1）PML（NLS-）与NLS-RARα均为癌性基因，PML（NLS-）与NLS-RARα蛋白均可促进APL的发生，可望作为APL治疗的新靶点；2）胞内筛选到与PML-C相互作用的蛋白9个，与NLS-RARα相互作用的蛋白8个；3）经胞内外验证与PML（NLS-）相互作用的蛋白有4个，包括RANBP9、BPHL、CNPY2和GINS2，经研究均与PML（NLS-）蛋白促进APL的发生有关；4）经胞内外验证与NLS-RARa相互作用的蛋白有4个，包括JTV1、GLUL、ISCA1和UBQLN1，经研究均与NLS-RARα促进APL的发生有关；5）研究发现变异蛋白PML（NLS-）与NLS-RARα相比野生型PML与RARα蛋白有显著的细胞定位变化，表明PML（NLS-）与NLS-RARα可望作为APL诊断的新靶点。本项目的研究成果将为深入探讨APL的分子发生机制，绘制新的PML-RARα融合蛋白的致病信号途径，并为探寻新的APL诊疗靶点与方法奠定实验与理论基础。通过本项目实施，共发表核心期刊论文26篇，其中SCI论文6篇，另有5篇SCI论文在投，申请并公开发明专利3项，培养研究生12名。