小分子干扰RNA沉默HIF-1α和VEGF抗TACE术后肝癌复发转移的实验研究

缺氧诱导的VEGF和HIF-1α表达在TACE术后肝癌复发转移中起关键的作用。前期研究显示，抑制VEGF的抗血管生成治疗并未明显延长患者的生存期，且有诱发肿瘤转移的潜在风险，原因可能与肿瘤缺氧加重有关。缺氧激活了一系列促瘤生长转移的基因，HIF-1α是这些基因的核心调控因子；前期研究还显示，抑制HIF-1α有明显的抑制肝癌细胞增殖的作用。那么，在抑制VEGF的同时，能否通过抑制HIF-1α对缺氧进行干预以获得协同作用抗TACE术后肝癌复发转移？本项目拟构建HIF-1α和VEGF的siRNA腺病毒载体并转染肝癌细胞株及动物模型，对模型采用TACE治疗，观察缺氧状态下联合抑制HIF-1α和VEGF对肿瘤增长浸润转移能力的影响，并初步探讨其作用机制，以解决TACE术后缺氧导致肿瘤进展影响远期疗效的重要问题，为抗TACE术后肝癌复发转移提供新的治疗思路,以期提高肝癌患者的长期生存率。

HIF-1α和VEGF在缺血缺氧诱发肿瘤复发转移中都起重要的作用，但单纯抑制VEGF有加重肿瘤缺氧诱发肿瘤转移的风险，可能与进一步的激活HIF-1α过度表达有关。是否能够同时抑制VEGF和HIF-1α以阻断缺氧导致的肿瘤复发转移？基于以上的假设，本项目首先在McA RH-7777和N1S1等多种大鼠肝癌细胞株中，在体外实验中验证了肿瘤细胞缺氧环境下能够导致HIF-1α和VEGF表达同时升高、肿瘤细胞的侵袭能力增强。共同沉默VEGFA及HIF-1α的肝癌细胞株比单独沉默VEGFA或HIF-1α更明显降低了VEGFA的分泌，抑制肿瘤EMT进程，降低肿瘤细胞的侵袭能力，并促进肿瘤细胞的凋亡。本项目在体内实验成功建立SD大鼠原位肝癌模型，并经肝动脉途径将HIF-1αsiRNA和VEGF siRNA腺病毒表达载体转染和TACE治疗。结果发现联合抑制HIF-1α、VEGF动物模型肿瘤在TACE术后肿瘤体积缩小率比TACE联合单独抑制VEGF组和单纯TACE治疗组高，TACE联合抑制HIF-1α和VEGF后肿瘤转移的发生率比单独抑制VEGF和单纯TACE治疗组低。TACE联合抑制HIF-1α和VEGF切除的肝癌组织中HIF-1、VEGF的表达下调，EMT过程的关键蛋白Snail、Vimentin 的表达也出现下调，而E-cadherin表达升高。 本项目通过体内实验，进一步证实了联合靶向抑制HIF-1α和VEGF两个基因，能更有效地抗肿瘤的基础上，又能同时解决缺氧诱发的促肿瘤侵袭转移等不利因素，获得更好的抗TACE术后肿瘤复发转移的治疗效果，从而为肝癌TACE联合靶向治疗提供新的方向，达到了本课题的预期目的。本课题至今已经发表了相关论文4篇，其中SCI收录2篇，另外有1篇英文论著已经录用，另1篇在审稿过程中。本课题共培养了3名硕士研究生，其中2名已经毕业。