基于“肾藏精”理论探讨“补肾填精”联合干细胞移植改善FSGS大鼠肾功能的作用及机制

慢性肾脏疾病是严重影响人类健康的主要疾病之一，目前正以惊人的速度持续增长。而局灶节段性肾小球硬化（FSGS）是一种常见的，又极易进展为终末期肾脏病的肾小球疾病。本研究基于中医"肾藏精"理论，运用"补肾填精"方法联合现代医学最新研究进展的骨髓间充质干细胞（BMSCs）治疗，将前期研究成功培养、扩增的BMSCs，荧光标记后直接注入FSGS大鼠体内，利用其归巢及修复能力，以达到改善甚至逆转FSGS发展的目的。通过该项研究，来探讨"补肾填精"和干细胞移植改善FSGS大鼠肾功能的作用和时机，以及多途径、多环节的作用机制。希望将干细胞与中医"肾藏精"理论这两种重要生理功能得到协调和统一，将其内涵在临床实践中得到不断充实和发展，以求对中医药的继承与创新。

研究背景.骨髓间充质干细胞（BMSCs）由于其多向分化潜能、免疫调节和多因子分泌功能等诸多特性而成为干细胞研究领域的热点，研究显示了 BMSCs 在组织修复和疾病治疗方面的应用潜能。局灶节段性肾小球硬化（FSGS）是一种极易进展为终末期肾脏病的肾小球疾病，目前对 FSGS 治疗措施仍然十分匮乏。因此，控制甚至逆转 FSGS 病程进展的方法，是目前待解决的问题。.研究目的.探讨了大鼠 BMSCs 移植改善 FSGS 肾功能损伤作用及其分子机制。.研究方法.应用细胞贴壁培养的方法完成大鼠 BMSCs 分离培养，用流式细胞检测细胞表面标志（CD29、CD90、MHC CLASSⅡ、CD45）表达和 BMSCs 向成骨和软骨分化成中胚层方向的潜能对原代培养的细胞进行鉴定。采用单侧肾切除合并阿霉素静脉双次注射方法建立大鼠 FSGS 模型，采用培养扩增的BMSCs通过尾静脉移植至FSGS大鼠体内，设第4周、第6周和双次移植组，生化检测 BMSCs 移植不同时间、不同次数对 FSGS 大鼠肾功能和尿蛋白的影响；分析补肾填精中药、BMSCs移植以及中药联合BMSCs移植治疗对FSGS大鼠24h尿蛋白、肾功能和白蛋白、肾脏病理的影响，并用RT-PCR和免疫组化检测肾组织基质金属蛋白酶（MMP-9）和基质金属蛋白酶抑制物（TIMP-1）、多种免疫炎症因子、抗炎因子的基因和蛋白表达。研究还采用人宫内膜干细胞（MenSC）体外培养扩增并移植至FSGS大鼠，初步探讨其对肾功能的影响。.研究结论.1、成功建立大鼠FSGS模型；.2、成功进行原代BMSCs培养，并鉴定和扩增；.3、研究表明BMSCs、补肾填精中药联合BMSCs移植均能改善FSGS大鼠肾功能，降低血肌酐和尿素氮；.4、首次证实了人MenSC移植也能改善 FSGS 大鼠肾功能；.5、BMSCs、补肾填精中药和中药联合BMSCs均能下调大鼠肾组织中TIMP-1表达，上调MMP-9表达，提升MMP-9/ TIMP-1比值，从而减少上皮细胞间充质细胞转分化的发生，抑制并降解细胞外基质，是防治肾纤维化的机制之一；.6、在FSGS大鼠模型中炎症与抗炎症反应同时存在，在补肾填精中药或者BMSCs移植后，抗炎症反应的bFGF、IL-10较炎症反应的TNF-α、IL-6、IFN-γ更为强力，是调节局部炎性微环境的途径是促进肾脏的修复机制之一。