睾丸局部感染时的锌指蛋白265与大鼠Sertoli细胞

锌指蛋白－ZNF265是一个参与细胞分化、发育、基因表达调控的多功能蛋白，在人类、小鼠中ZNF265广泛稳定表达。我们前期工作表明，ZNF265在大鼠Sertoli细胞（支持细胞）呈特异性表达，且表达量与感染密切相关。同时研究发现：大鼠Sertoli细胞在睾丸局部感染时，能通过改变其IL-1、IL-6、TGF-β和FasL的分泌或表达格局，在局部抗感染免疫中发挥重要的免疫调节作用，并参与、维持大鼠睾丸的免疫豁免。本项目研究：大鼠睾丸局部感染时，ZNF265表达格局与大鼠Sertoli细胞免疫功能的关系，对Sertoli细胞IL-1、IL-6、TGF-β、MCP-1、FasL及TLR分泌或表达格局的影响、调节，以揭示睾丸局部感染时锌指蛋白－ZNF265对大鼠Sertoli细胞免疫作用及相应基因表达的调节，为寻找免疫调节，免疫干预的新靶点提供可靠的实验基础。

Sertoli细胞(支持细胞)是睾丸主要的基质细胞，参与血-睾屏障的组成，维持调控睾丸局部的免疫豁免[1,2]。锌指蛋白265(Zinc finger protein 265, ZNF265)是含两个锌指结构及具有丝氨酸/精氨酸富集区的锌指蛋白[3]，目前研究主要认为它具有RNA结合功能，和转录、前体mRNA剪切相关[4,5]。我们在前期的研究中发现，ZNF265在大鼠Sertoli细胞中特异性高表达，且表达量和感染密切相关[6]；而Sertoli细胞可以通过改变IL-1、IL-6及TGF-β等的表达，发挥免疫调节作用，增强睾丸局部抗感染的免疫应答[7,8]。 本论文通过慢病毒介导的RNAi技术，沉默Sertoli细胞中ZNF265的表达，观察Sertoli细胞在溶脲脲原体(Ureaplasma Urealyticum，UU) 感染后，对IL-1α、IL-6、MCP-1、Toll样受体（TLR2、TLR6）、TGF-β、FasL表达变化及对NF-κB信号通路激活的影响；另外通过染色质免疫共沉淀（ChIP）技术进一步从蛋白质-DNA作用的角度探讨ZNF265在Sertoli细胞中抗感染和免疫调节作用及可能的作用机制。 研究结果发现：慢病毒介导的RNAi技术有效的干扰了ZNF265在大鼠Sertoli细胞中的表达。在RNAi后，UU感染的早期，IL-1α、IL-6、MCP-1、TLR2和TLR6表达升高，NF-κB激活增加，TGF-β及FasL表达也升高；而在感染后期，IL-1α、IL-6、MCP-1、TLR2和TLR6表达下调，NF-κB激活减弱，TGF-β及FasL表达仍持续升高且达最高水平。另外通过ChIP分析发现，ZNF265蛋白与TGF-β及FasL的启动子区域结合，并且TGF-β及FasL在RNAi组的表达水平，较无RNAi组明显升高。 上述结果表明：ZNF265在Sertoli细胞中发挥了重要的抗感染功能，可能通过和TGF-β及FasL相互作用，在Sertoli细胞免疫调节中共同发挥重要作用。