从调控肠粘膜上皮凋亡探讨锦红汤阻断急性胆源性感染全身炎症反应综合征的机制研究

急性胆源性感染可引起肠粘膜功能障碍，细菌和内毒素移位入血，二次激发炎症级联反应导致SIRS发生。肠粘膜屏障受损与小肠上皮细胞过度凋亡密切相关。MAPK通路是影响小肠上皮细胞凋亡的主要信号通路。前期研究证实锦红汤对该病引发的SIRS有调控作用。.本项目是在前期研究的基础上，采用real time-PCR、Western blot、流式细胞术等方法，从体内、外观察锦红汤干预后急性胆源性感染大鼠炎性指标（IL-6、IL-8、TNF-α及内毒素等）、SIRS相关指标（白细胞、D乳酸、PaCO2等）与肠粘膜屏障功能评价指标（肠粘膜上皮细胞形态学及MAPK通路相关信号分子Caspase-3、ERK1/2、JNK、P38、bax、bcl-2 蛋白及基因）变化的相关性及内在联系。其结果将为进一步阐明锦红汤防治该病的主要作用环节及制定减轻或阻断SIRS发展进程、改善疾病预后的综合防治策略提供科学依据。

本项目从调控肠黏膜细胞凋亡的角度研究锦红片防治急性胆源性感染的分子机理，采用real time-PCR、Western blot等方法，从体内、外观察锦红汤干预后急性胆源性感染大鼠炎性指标（TNF-α及内毒素等）、SIRS相关指标（D乳酸）与肠粘膜屏障功能评价指标（肠粘膜上皮细胞形态学及MAPK通路相关信号分子ERK1/2、JNK、P38、bax、bcl-2 蛋白及基因）变化的相关性及内在联系。.体内实验发现：锦红片在降低血清DAO活力、D-乳酸及内毒素含量，保护肠黏膜细胞屏障及功能方面明显优于庆大霉素；促进肠黏膜细胞Bcl-2的表达，抑制其Bax的过表达，提高Bcl-2/Bax比值，以及可以抑制Bax、P38、ERK及JNK基因及蛋白表达。.体外实验：建立了较稳定的大鼠小肠黏膜上皮细胞体外原代培养细胞株，为小肠黏膜屏障功能障碍的生理病理及药物作用机制研究提供了体外研究平台。同时发现，急性胆源性感染早期即存在明显的小肠黏膜上皮细胞过度凋亡情况，MAPKs信号转导通路均参与了此过程；而锦红片能够在早期起到降低LPS至急性胆源性感染大鼠小肠黏膜上皮细胞毒性的作用，改善细胞增殖、存活及凋亡情况，并能够抑制肠黏膜细胞的过度凋亡，修复和保护肠黏膜的正常细胞结构，间接抑制LPS的损害作用，其效果明显优于庆大霉素，其机制可能与抑制P38/MAPK信号转导通路的过表达有关。.通过以上体内及体外研究结果，我们可以得出以下结论：肠黏膜屏障功能受损—SIRS—MODS—MOF是急性胆源性感染发病机制中关键的转归环节；抑制其肠黏膜细胞过度凋亡、维系肠黏膜细胞屏障及其功能是锦红片治疗急性胆道感染的重要分子学机制，亦是锦红片泻热通腑之功效的主要作用靶点及物质基础，为急性胆源性感染中医“从肠论治”假说提供了科学依据，为制定减轻或阻断SIRS发展进程、改善疾病预后的综合防治策略提供科学依据。