石斑鱼肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6）在抗病毒天然免疫反应中的作用

Grouper, Epinephelus spp., one of the major species being maricultured in China, are high-priced and popular seafood fish.However, with the rapid production and development of fish worldwide, fish diseases have become severe and threaten the fish industry in recent years. Singapore grouper iridovirus (SGIV) is a major viral pathogen causing high mortality and huge economic losses in grouper cultures. So far, the recognition mechanisms of host cells to SGIV infection remain .poorly understood. Our previous studies indicated that grouper TLR9, MyD88 and IRF7 are potentially involved in type I IFNs production induced by TLRs-mediated antiviral immune responses to the invasion of SGIV, and play important roles in host innate defense against SGIV infection. TNF receptor-associated factor 6 (TRAF6) is an important signaling adapter molecule among the signaling.Now the roles of TRAF6 from fish in the regulation of viral infection and replication and the molecular mechanisms of host cells to antivial immune responses have not been reported. In this study, a new TRAF6 from orange-spotted grouper, Epinephelus coioides will be isolated and characterized on the basis of our previous research. The regulation of SGIV infection and replication and the molecular mechanisms of grouper cells to antiviral innate immune responses of TRAF6 will be thoroughly studied. The results will be helpful for a better understanding of the SGIV infection and pathogenesis mechanisms, and ultimately development of new control and therapeutic strategies.

石斑鱼是我国南方重要的海水名贵养殖鱼类之一，经济价值极高。在高密度集约化养殖条件下各种病害频繁爆发是其可持续健康发展的主要瓶颈，虹彩病毒SGIV是其中最严重的传染性病毒病原之一。目前，有关石斑鱼对SGIV感染的免疫应答机理仍不十分清楚。我们前期的研究表明，石斑鱼感染SGIV后，其先天性免疫因子TLR9、MyD88及IRF7在TLRs介导的抗病毒免疫反应诱导I型干扰素产生中发挥重要作用，而TRAF6 是该途径的重要信号转导分子。目前还没有鱼类TRAF6对病毒感染和复制的调节作用以及在抗病毒天然免疫反应中的作用机制报道。本项目拟在前期研究基础上，进一步克隆和表达石斑鱼TRAF6基因，系统研究TRAF6对SGIV感染和复制的调节作用以及在抗病毒天然免疫反应中的作用机制。研究成果将为阐明SGIV 感染和致病的分子机理奠定基础，为石斑鱼虹彩病毒病的预防和治疗提供新的理论依据和潜在靶点。

石斑鱼是我国南方重要的海水名贵养殖鱼类之一，经济价值极高。在高密度集约化养殖条件下各种病害频繁爆发是其可持续健康发展的主要瓶颈，虹彩病毒 SGIV 是其中最严重的传染性病毒病原之一。目前，有关石斑鱼对 SGIV 感染的免疫应答机理仍不十分清楚。我们前期的研究表明，石斑鱼感染 SGIV 后，其先天性免疫因子 TLR9、MyD88 及 IRF7 在 TLRs 介导的抗病毒免疫反应诱导 I 型干扰素产生中发挥重要作用，而 TRAF6 是该途径的重要信号转导分子。本项目进一步克隆和表达石斑鱼 TRAF6 基因，并系统研究 TRAF6 对 SGIV 感染和复制的调节作用以及在抗病毒天然免疫反应中的作用机制。研究结果表明TRAF6在所有检测的组织中均有表达，在肠道和胃中表达量较高。石斑鱼虹彩病毒SGIV感染后石斑鱼肝脏中的表达量明显升高。构建原核表达载体，成功进行了原核表达，并获得了多克隆抗体。免疫荧光结果表明TRAF6在细胞质和细胞核中均有表达，但是主要在细胞质中表达。构建TRAF6的真核表达载体，成功获得稳定表达的细胞系。SGIV感染稳定筛选的细胞系后，TRAF6明显具有抑制SGIV诱导的细胞凋亡，同时对病毒复制也具有抑制效果。石斑鱼TRAF6抑制NF-κB 、IFNβ和ISRE报告基因的活性，N端和TRAF结构域起主要作用。SGIV感染后NF-κB、IFNβ和ISRE的活性明显增加。共转染IRF3和IRF7和TRAF6后，报告基因IFNβ的活性明显增加，表明TRAF6通过激活IFR3和IRF7参与抗病毒免疫反应。研究成果将为阐明 SGIV 感染和致病的分子机理奠定基础，为石斑鱼虹彩病毒病的预防和治疗提供新的理论依据和潜在靶点。