射频消融激活树突状细胞疫苗治疗兔VX2肝种植瘤的研究

射频消融（RFA）治疗肝癌后常见消融灶处肿瘤残留、肝内外肿瘤新生或转移。除了操作等因素，还可能与全身及消融灶局部免疫应答较弱有关。树突状细胞（DC）是功能最强的专职性抗原递呈细胞，但常因失活而无法发挥肿瘤免疫潜能。RFA可使消融灶及外周血中免疫细胞浸润、增殖，但对DC的作用还存在争议。本课题首先对兔VX2肝种植瘤实施射频消融，力图通过消融灶释放的大量肿瘤抗原及消融灶外周大量热休克蛋白来提升DC识别、摄取和加工肿瘤抗原的免疫潜能以及后续强力激活特异性细胞毒性T淋巴细胞识别和杀伤肿瘤细胞的能力，并制备DC热休克肿瘤疫苗。然后再通过LPS等刺激，使DC热休克肿瘤疫苗成熟活化。最后，射频消融分别联合未活化和活化的DC热休克肿瘤疫苗治疗兔VX2肝种植瘤，检测联合治疗对兔全身和局部免疫系统的激活效应及对肿瘤生长、复发、 转移和生存的影响。初步探讨物理疗法联合免疫疗法综合治疗肝癌模式的可行性及价值。

课题基本按照上述要点和研究计划开展并顺利完成预期目标。. RFA治疗后释放大量肿瘤抗原，抗原的释放产生的生物效应还不是非常清楚。我们首先在大量的临床工作中收集到珍贵样本，射频消融治疗之后病人的组织样本20例，免疫组织化学方法研究了RFA对免疫细胞激活的影响。我们观察到天然免疫细胞巨噬细胞在射频消融后数量明显增多；CD4+T细胞及CD8+T细胞活化也明显增多，说明RFA后大量肿瘤抗原的释放可同时有效激活患者体内天然免疫细胞及T细胞。治疗前后患者血清学免疫相关因子做了检测，明确射频治疗后1天存在短暂的免疫抑制。为了进一步明确RFA产生的免疫细胞的激活对肿瘤生长、复发的影响，我们建立了有效的动物模型VX2肝脏原位荷瘤，初步探讨了DC疫苗对RFA后肿瘤复发的影响。初步的研究结果表明，RFA联合DC疫苗可以明显延长肿瘤种植兔的存活时间。在本项目的资助下我们进一步应用比较成熟的小鼠模型，探讨了化疗联合DC疫苗对肿瘤复发的影响，证明了化疗后给予DC疫苗可以有效减少肿瘤的复发。