TLR3、TLR7配体增强猪繁殖与呼吸综合征疫苗细胞免疫应答的机制研究

Porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) inactivated vaccine could not induce cell-mediated immunity and generate sufficient immune protection for pigs, enhancing the cell-mediated immunity of PRRS inactivated vaccine will provide a new way for the development of PRRS vaccine. It was found that TLR3 and TLR7 ligand could enhance cell-mediated immunity of PRRSV antigen and induce Th1-type cytokine response in vitro and in mice from our preliminary experiments. On this basis, Real-time PCR, FACS, dendritic cells activated CD3+ T cells assay, cytokine determination by ELISA, T lymphocyte proliferation assay, CTL assay will be used for evaluate PRRSV specific cell-mediated immune response both in vitro and in vivo (mice and pigs). Challenge protection experiment will be also conducted in pigs. TLR3, TLR7 ligand could enhance cell-mediated immune response of PRRS inactivated vaccine will be confirmed and the mechanism will be elucidated. This study will provide new approaches for the development of PRRS inactivated vaccine.

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）灭活疫苗存在着不能产生细胞免疫力也不能对猪体产生足够免疫保护力的问题，提高PRRS疫苗的细胞免疫力将为PRRS疫苗的发展开辟新的途经。本项目首先通过体外细胞培养和小鼠免疫的预试验初步表明TLR3、TLR7配体能够增强PRRSV抗原的细胞免疫应答并且诱导Th1型细胞反应。在此基础上，本项目将运用Real-time PCR、FACS、树突状细胞对CD3+ T细胞的活化测定、ELISA细胞因子含量测定、淋巴细胞转化试验、CTL试验等技术方法，通过体外细胞培养、小鼠、猪体体内免疫试验和攻毒保护试验，系统阐述TLR3、TLR7配体能够增强PRRS灭活疫苗细胞免疫应答并阐明其机制。本研究将为PRRS 灭活疫苗的研制提供新的认识和途径。

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是危害养猪业的重要疫病之一。PRRS灭活疫苗存在着不能产生细胞免疫力也不能对猪体产生足够免疫保护力的问题，提高PRRS疫苗的细胞免疫力将为PRRS疫苗的发展开辟新的途经。本项目通过体外培养猪单核细胞源树突状细胞MoDCs发现Poly(I: C)、Imiquimod和PRRSV灭活抗原组Th1型细胞因子（IFN-γ, IL-12）和Th2型细胞因子（IL-6, IL-10）的mRNA水平和蛋白水平显著高于Poly(I: C)或Imiquimod单独使用，并且发现该作用依赖于TRIF/MyD88-NF-κB信号通路。另外，Poly(I: C)、Imiquimod和PRRSV灭活抗原组MoDCs吞噬PRRSV灭活抗原的能力也显著增强。小鼠免疫学试验表明：Poly(I: C)、Imiquimod和PRRSV灭活抗原组PRRSV特异性T淋巴细胞增殖、CD4+、CD8+ T细胞的百分比、分泌IFN-γ和IL-4的CD3+ T细胞的百分比、Th1型细胞因子（IL-12、IFN-γ）和Th2型细胞因子（IL-4、IL-6）的分泌量、血清中和抗体都显著增强。因此，TLR3、TLR7配体合用能够通过TRIF/MyD88-NF-κB信号通路增强树突状细胞（DCs）递呈PRRSV抗原的能力，这为PRRS 灭活疫苗的研制提供了新的认识和途径。此外，我们在其他相关的PRRS的病原学、免疫机制及防控技术也取得了重要成果。