内源性大麻素影响食管痛觉高敏形成的机制研究

食管痛觉高敏是非糜烂性反流病（NERD）的另一重要发病机制。内源性大麻素可通过激活大麻素受体和辣椒素受体，分别发挥止痛和促痛两种不同效应，调控内脏痛觉高敏的发生发展。其在食管中的研究尚缺。本研究提出如下假设：酸刺激食管后，内源性大麻素上调，激活大麻素受体或辣椒素受体，影响食管痛觉高敏的形成和维持。我们将采用人体食管粘膜标本及急性酸灌注动物模型观察内源性大麻素、大麻素受体及辣椒素受体的表达变化，结合离体及在体激动剂、拮抗剂的干预，明确内源性大麻素的作用及机制。从在体、分离神经元等多层次，利用肌电图、膜片钳等电生理方法结合免疫荧光、Real-Time PCR、Western blot等分子生物学技术验证上述假设。旨在进一步探讨NERD发病的分子及电生理机制。

胃食管反流病（GERD）发病机制复杂，其中内脏高敏感和炎症在GERD起病发病过程中起到重要作用。GERD患者食管黏膜中的炎症介质可降低辣椒素受体(transient receptor potential vanilloid 1，TRPV1)等酸敏感受体的信号转导阈值，从而介导外周致敏。内源性大麻素系统与TRPV1发生交互作用，通过激活大麻素受体和辣椒素受体，分别发挥止痛和促痛两种不同效应，调控内脏痛觉高敏的发生发展。本研究采用胃底结扎联合幽门限制的方法建立胃食管反流大鼠模型，通过组织病理学染色观察大鼠食管粘膜，通过免疫荧光、western-blot、real-time PCR等分子生物学技术检测大麻素受体1&2在模型大鼠食管粘膜以及背根神经节上的变化。结果发现：1、HE染色显示实验组大鼠食管粘膜慢性炎症改变，对照组大鼠食管粘膜无异常。2、免疫荧光结果提示：实验组大鼠背根神经节上TRPV1阳性率高于对照组，而大麻素受体1&2在则低于对照组。3、western-blot结果提示：TRPV1在实验组大鼠背根神经节中表达上调，而大麻素受体1&2在实验组大鼠的食管粘膜以及背根神经节中表达下降。两者表达呈负相关。4、Real-time PCR结果同样显示大麻素受1&2在实验组大鼠中变化下调。上述结果证实了辣椒素受体1、大麻素受1&2参与胃食管反流发病过程，内源性大麻素上调，激活大麻素受体或辣椒素受体，影响食管痛觉高敏的形成和维持，为胃食管反流病治疗提供新靶点。