sCD83对同种异体大鼠肝移植免疫耐受的研究

The induction of immune tolerance following solid organ transplantation is the hot point and goal of researchers in organ transplant fields for many years. The immune inhibition effects of sCD83 have confirmed recently, but the effects of sCD83 on liver transplantation have not been reported. To study the immune tolerance effect of sCD83 on the rat liver transplantation, we construct the recombinant plasmid expressing human soluble CD83 gene, which has been expressed and purified it in E coli. Also we observed the effect of sCD83 on the mRNA express of immune inhibition factor such as IDO, TGF-β and Foxp3, and the effect of sCD83 on the express of HLA-Ⅱantigen, CD80 and CD86 costimulation molecule on DC, and analyze the effect of sCD83 on express of IDO+DC, TGF-β+CD4+T, CD4+CD25+Foxp3+T cells after rat liver transplantation. By effect of DC on TGF-β secretion, sCD83 activated IDO signaling activity, leading to the long time IDO expression of DC, increasing CD4+CD25+Foxp3+T cell production, to elaborate the mechanism of immune tolerance of sCD83 after liver transplantation in vitro experiments, which may provide scientific experimental basis and new ideas for clinical transplantation tolerance induction.

诱导实体器官移植后免疫耐受是多年来器官移植工作者追求的目标和研究的热点。近年来sCD83的免疫抑制作用已经证实，但是sCD83对肝脏移植免疫耐受的研究未见报道。本研究通过构建人可溶性CD83基因原核表达载体，并在大肠杆菌中表达和纯化，研究sCD83对大鼠肝脏移植的免疫耐受作用。观察sCD83对移植肝免疫抑制因子IDO、TGF-β及Foxp3mRNA表达的影响，以及DC表面HLA-Ⅱ抗原和CD80、CD86共刺激分子表达的改变，分析sCD83对大鼠肝移植后致耐受性细胞IDO+DC、TGF-β+CD4+T、CD4+CD25+Foxp3+T表达的影响。通过体外实验，证实sCD83通过影响DC对TGF-β的分泌，激活IDO信号转导活性，导致DC长时间IDO的表达，增加CD4+CD25+Foxp3+T细胞的产生，阐述sCD83对肝移植后的免疫耐受机制，为临床移植耐受的诱导提供科学的实验。

移植后如何诱导受者的免疫系统对供者器官长期特异性的无应答状态，但对其他异己抗原仍表现正常的免疫应答即诱导供者特异的免疫耐受是移植科学家长期以来致力研究的热点。试验证实，DC细胞和淋巴细胞共培养时，sCD83对DC具有免疫耐受作用，其机制可能与sCD83降低IL-2的表达，升高IL-10、TGF-β1及IFN-γ改变Th1和Th2分化，上调DC表面IDO的表达，下调DC表面共刺激分子CD80、CD86、MHCII的表达，促进致耐受性DC的产生相关；同时与sCD83上调CD4+TGF-β1和Treg调节性细胞等具有免疫耐受作用的细胞相关。. 建立LEW→BN大鼠原位肝脏移植模型后，各组各时间段受体大鼠体重及肝功能变化无显著差异。生存率分析提示：sCD83组与对照组有统计学差异，但与抗体及药物组无明显差异。HE染色证实肝脏经历急性排斥反应过程。与体外实验一致，ELISA证实大鼠外周血清细胞因子表达情况显示：sCD83能下调受体大鼠外周血IL-2的表达，上调IL-10、 IFN-γ、TGF-β1的表达。受体大鼠肝脏中Foxp3、TGF-β1及IDO的 mRNA检测证明：sCD83能上调这些免疫耐受或抑制作用的mRNA表达，同时sCD83能下调受体大鼠肝脏中DC表面共刺激分子CD80、CD86、MHC-II的表达，而上调IDO的表达及移植肝中CD4+TGF-β1T细胞和Treg细胞的比率。同样1-MT及anti-TGF-β1均能特异性地阻断sCD83对这些的表达作用. 总之，sCD83对急性排斥反应具有抑制作用，能延长同种异体大鼠肝移植后的生存时间，但是未能证实具有长期生存的效果，即达到免疫耐受状况。其可能的机制为：1、下调细胞因子IL-2的表达，上调IL-10、 IFN-γ、TGF-β1的表达，从而改变T1/T2细胞分化，使T细胞往有利于免疫抑制的方向发展。2、下调受体大鼠肝脏中DC表面共刺激分子CD80、CD86、MHC-II的表达，使成熟的免疫原性的DC向免疫耐受性的DC分化。3、通过激活TFG-β1及IDO通路，上调移植后致耐受性的Treg细胞及IDO阳性DC细胞产生免疫抑制或免疫耐受作用。