蒙药嘎日迪-13阻断炎症反应保护缺血性脑损伤机制研究

嘎日迪-13是蒙医治疗"萨病"的常用药之一。研究表明，该药对缺血性脑损伤具有明显保护作用，但其作用机制尚不清楚。前期实验发现，该药对缺血性脑损伤的保护作用与抑制炎症反应有关。据此本课题在线栓法建立大鼠脑缺血损伤模型的基础上，采用① ELISA法定量观察药物对缺血后不同时间点脑组织和血清中炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6、 IL-8、ICAM-1、VCAM-l 、P-选择素、E-选择素含量变化的影响；②免疫组化法定位观察上述炎性因子表达部位以及药物对其表达的影响；③ RT-PCR方法观察上述炎性因子在分子水平上的表达以及药物对其表达的影响；④MPO活性测定法观察药物对白细胞浸润的影响。通过上述方法探讨嘎日迪-13对细胞因子的产生、细胞黏附分子的表达及白细胞浸润的影响，揭示炎症反应与缺血性脑损伤的关系，为阐明嘎日迪-13阻断炎症反应保护缺血性脑损伤的作用机制提供理论依据。

按计划完成了项目研究内容，主要研究成果：.1、大鼠两种局灶性脑缺血模型的比较及相关指标分析。结果表明，虽然神经功能评分、脑梗死面积、血清NSE含量都是反映脑缺血损伤的重要指标，但三者之间都不存在相关性。该研究为后续研究模型和观察指标的选择奠定了基础。.2、从病理形态、血液生化、蛋白和基因表达等不同的层面观察了缺血后不同时间点炎性因子的变化以及药物的影响。结果表明，脑缺血后，大鼠神经功能受损，神经功能评分升高，脑组织出现严重病理改变，神经元大量坏死导致血清中NSE含量迅速升高；缺血脑组织和血清中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8和CAM-l、VCAM-l 、P-选择素、E-选择素活性明显升高；海马、纹状体和大脑皮质区三个区域的上述因子阳性表达都明显升高，并且在脑缺血后1h即开始表达，脑缺血后24h达到高峰，随后开始降低；脑组织中上述炎性因子的mRNA表达均明显升高，大多数12 h达到高峰，之后在24 h出现下降，只有ICAM-1 mRNA一直到120h仍保持高水平表达。嘎日迪-13可显著改善大鼠神经功能、降低脑组织病理改变程度和血清中NSE的含量，降低缺血脑组织和血清中细胞因子和细胞黏附分子的产生以及MPO活性，在各脑区、各时相均能显著降低上述炎症因子的阳性表达，减缓因脑缺血而导致的炎症发应从而起到对脑缺血的保护作用。该研究在同类研究中首次对介导炎症反应的主要细胞因子和细胞黏附分子在脑缺血后不同时间点、不同部位、不同水平的变化进行定性和定量的系统研究，对脑缺血后不同时间点MPO活性进行检测，从理论上揭示上述细胞因子的产生和细胞黏附分子表达以及白细胞浸润与缺血性脑损伤的关系；首次探讨嘎日迪-13阻断炎症级联反应保护缺血性脑损伤的作用机制，为嘎日迪-13的临床应用提供理论和实验依据；首次从蛋白和分子水平探讨嘎日迪-13保护缺血性脑损伤的作用机制，丰富了蒙药药理研究的内容。.3、保护脑缺血的物质基础初步探讨。挥发油、矿物质、减毒物质和麝香是嘎日迪-13中的主要组分，其中挥发油、矿物质、麝香可抑制血清炎症因子的表达，但单独应用却不能缓解脑缺血的神经症状和形态改变，可能须与其他组分共同作用才能达到保护脑缺血损伤的目的。该研究为进一步阐明嘎日迪-13保护脑缺血的物质基础提供了初步的结果,并据此申报了专利“一种石菖蒲、肉豆蔻和丁香提取混合物及其提取方法和应用”。