四季蜜龙眼LFY同源基因表达发生变异的分子机制研究

前期研究发现，四季蜜嫁接苗新梢中有LFY同源基因（LLFY）的表达，而普通龙眼品种嫁接苗新梢中LLFY没有表达，四季蜜具有早花的变异性状与其LLFY的表达变异有关。在此基础上，本项目拟从四季蜜LLFY启动子和LLFY上游调控基因两方面探寻LLFY表达变异的分子机制。首先采用生物信息学和转基因方法比较和分析四季蜜龙眼和普通龙眼LLFY启动子序列和功能，判断四季蜜LLFY启动子是否存在变异；如果存在变异，拟采用酵母单杂交技术获得与变异启动子序列作用的调控蛋白并用Real-time PCR方法研究其功能；如果不存在变异，拟采用抑制消减杂交技术获得四季蜜龙眼嫁接新梢与普通龙眼嫁接新梢中差异表达的基因，研究其功能与LLFY表达的关系。本项目的完成将有助于了解四季蜜LLFY表达变异的分子机制，研究结果对于揭示木本植物从幼年态向成年态转变的调控途径，实现龙眼成花调控具有重要的理论和实践意义。

按照项目计划完成研究工作。首先克隆了‘四季蜜’龙眼和普通龙眼‘立冬本’LFY同源基因（LLFY）启动子序列，进行了序列比较以及转化烟草表达研究，结果表明‘四季蜜’龙眼LLFY基因启动子没有发生变异，‘四季蜜’中LLFY表达变化是上游调控基因作用的结果。然后，采用转录组测序和定量PCR技术，分析了‘立冬本’和‘四季蜜’两个品种嫁接新梢中成花诱导相关基因以及差异表达的基因，获得了与‘四季蜜’LLFY表达变异相关的上游调控基因，其中TFL、FLC和SVP三个抑制基因表达量的下调是引起‘四季蜜’中LLFY表达量上升的主要原因。对三个抑制基因编码区cDNA及基因组序列进行克隆和研究，两个品种间序列没有发生变异，其中SVP具有不同拷贝和不同剪接。对SVP功能的研究表明SVP（CL645）表达量的降低促进‘立冬本’成年树花芽的分化。研究结果初步揭示了龙眼幼年态向成年态转变的分子调控途径。