对虾白斑综合症病毒极早期转录因子的功能研究

对虾白斑综合症病毒（WSSV）是危害水产养殖业的主要病害之一，目前对该病毒感染分子机制的了解十分有限。在前期研究中我们通过生物信息学分析发现一些WSSV极早期基因可能编码转录因子。这类在病毒感染刚开始时就得以表达的极早期转录因子不仅能够控制病毒后续的基因表达，而且可以通过改变宿主细胞的生理免疫状态来促进病毒感染的进程，因此它们在病毒感染的过程中是关键的操控者。对于这类因子的研究将有助于揭示WSSV感染的核心机制。因此，本项目将在对WSSV极早期转录因子进行鉴定的基础上，选择其中1-2个对其功能进行深入研究；主要包括下游靶基因的筛选、相互作用蛋白的筛选，以及对病毒感染过程和宿主细胞状态的调控情况分析等。本研究将增进我们对WSSV感染分子机制的了解，并能够为病害的防治提供新思路以及适用的药物靶点。

对虾白斑综合症病毒（WSSV）是危害对虾养殖业最主要的病原体之一。本项目从WSSV极早期基因中鉴定了一批具有转录激活活性的蛋白，并对其中的两个蛋白IE1和WSV056进行了深入的研究。发现这两个病毒蛋白都能够与一个重要的细胞周期调控因子——成视网膜母细胞瘤蛋白（retinoblastoma protein, RB）结合，它们的结合释放了RB-E2F复合体上的E2F蛋白，改变了E2F下游基因的表达，最终对宿主的细胞周期产生影响，使位于有丝分裂G2/M期的细胞显著增加。RNA干扰实验证实，对IE1和WSV056表达的干扰会阻碍WSSV感染的进程，说明IE1和WSV056通过对宿主细胞周期的调控在病毒感染的过程中起到重要的作用。另一方面，为了找到IE1和WSV056作为转录因子所控制的启动子，我们构建了包含181个WSSV启动子的启动子活性报告质粒文库，用于和IE1和WSV056共转染从而确定这两个蛋白的靶基因。此外，在本研究中我们还进一步优化了螯虾细胞原代培养条件，建立病毒体外感染的监测方法，以及在原代虾细胞中表达外源基因的方法，完善了WSSV的体外研究技术。本项目的研究首次较详细的阐述了WSSV极早期蛋白对宿主细胞的调控机制，这一发现有助于揭示WSSV感染的机理，为该病毒病的防治提供依据。