糖尿病肾病肾小球系膜细胞前列腺素受体脱敏对其功能的影响及小檗碱的作用

糖尿病属中医"消渴"范畴，小檗碱是黄连的主要有效成分，是其治疗消渴的物质基础。糖尿病肾病（DN）是糖尿病常见且严重的并发症，信号转导通路的异常改变是DN形成的重要机制和研究热点。前列腺素受体（EP）的正常脱敏和复敏对受体功能的调节非常重要，是保持EP-G蛋白-cAMP信号通路正常转导的关键，DN肾小球系膜细胞EP受体脱敏的异常改变可能会影响到系膜细胞的生理和病理功能。本项目拟采用Western Blot等分子生物学技术和方法，在本课题组前期对DN大鼠肾小球系膜细胞信号通路研究的基础上，首次探讨DN大鼠肾小球系膜细胞EP受体的表达和脱敏对系膜细胞功能的影响及小檗碱的作用，进一步阐明DN的发病机制及深入认识小檗碱治疗DN的分子机制，为临床合理应用小檗碱治疗DN提供更加充分的理论依据,并试图寻找新的药物作用靶点，为开发新型治疗DN药物奠定基础。

糖尿病属中医“消渴”范畴，小檗碱是黄连的主要成分，是其治疗消渴的物质基础。糖尿病肾病（DN）是糖尿病最为严重的并发症之一，信号通路的异常变化是糖尿病肾病发生发展的重要机制和研究热点。前列腺素受体的正常脱敏和复敏对受体功能的调节非常重要，是保持EP受体-G蛋白-cAMP信号通路正常转导的关键，DN肾小球系膜细胞EP受体脱敏的异常改变可能影响系膜细胞的生理和病理功能。因此，本课题组通过对糖尿病肾病大鼠造模条件的优化、对糖尿病肾病大鼠应用小檗碱治疗前后生化指标及肾脏整体指标的研究，以及对糖尿病肾病状态下肾小球系膜细胞应用小檗碱干预前后前列腺素EP受体信号通路变化的研究来阐明DN可能的发病机制以及小檗碱治疗糖尿病肾病的可能分子机制。在实验过程中，课题组采用电镜、生化分析和病理等技术分析肾脏超微结构、生化指标以及肾功能等指标，结果发现小檗碱可以改善异常的肾脏超微结构和生化指标，同时可以缓解疾病状态下肾小球细胞外基质的堆积、肾小球和小管基底膜的增厚、炎性细胞浸润等病理症状。课题组取肾组织和培养的原代细胞，通过免疫组化法、Western Blot、ELISA、流式细胞术和激光共聚焦等实验方法检测疾病状态和小檗碱治疗后肾脏组织中蛋白分子的变化以及细胞内信号通路相关蛋白的表达和分子的变化，结果发现小檗碱可能通过影响肾小球系膜细胞中EP受体的异常表达和脱敏、调节EP4-Gαs-cAMP和EP1-Gαq-Ca2+信号通路来发挥其缓解DN的作用。在小檗碱治疗糖尿病肾病大鼠过程中，肾小球系膜细胞中EP1和EP4受体亚型可能成为药物作用的靶点，但还需要进一步研究加以证实。