瘢痕疙瘩中TIEG1对Smad7转录调控的研究

TGF-β1/Smads信号转导通路的持续激活是瘢痕疙瘩形成的重要机制。目前研究发现这条通路最重要的负反馈调节信号分子Smad7表达明显下调，但是，Smad7下调的机制尚不清楚。我们的研究发现：Smad7基因的启动子上有明确的TIEG1 调控位点；转录抑制因子TIEG1在瘢痕疙瘩中表达明显上调；治疗瘢痕的有效药物积雪草甙抑制了瘢痕疙瘩成纤维细胞TIEG1的上调。由此，我们首次提出了Smad7下调的新机制：瘢痕疙瘩发生时，TIEG1诱导表达并直接调控下调了Smad7，从而导致TGF-β1/Smads通路的持续激活。本项目拟进一步采用siRNA、腺病毒表达技术以及启动子5'末端序列续减、启动子定点突变和EMSA方法,旨在获得TIEG1直接调控Smad7基因的可靠证据。本项目将阐明TIEG1对Smad7的调控作用和机制，为确立TIEG1作为瘢痕疙瘩治疗的新靶点提供更充分的科学依据。

瘢痕疙瘩的发病机制目前仍不清楚。TGF-β1/Smads信号转导通路的持续激活是瘢痕疙瘩形成的重要机制，而这条通路最重要的负反馈调节信号分子Smad7表达明显下调。我们的研究证实了：1. 转录抑制因子TIEG1在瘢痕疙瘩中表达明显上调，积雪草甙降低了TIEG1的表达，同时上调了Smad7的表达。2.体内、体外实验证实TIEG1沉默可以下调Smad7的表达，抑制I、Ⅲ型胶原生成和成纤维细胞增殖。3. 5'末端序列续减方法构建Smad7启动子质粒： -408/112bp，-283/112bp， -124/112bp，转染到瘢痕疙瘩成纤维细胞，确定了Smad7启动子的核心区域-124/112bp。4. 构建了突变型报道基因质粒pmt-Smad7-Luc（-124/112bp中的Sp1位点： GGCGG→TTCGG），确定这一突变消除Smad7启动子在成纤维细胞的反应。目前实验还在正进行，即用EMSA证实Smad7启动子核心区的SP1 结合序列是否能够与TIEG1结合。所以，我们的研究初步证实了瘢痕疙瘩中TIEG1直接调控Smad7基因表达。同时，我们也发现了瘢痕疙瘩中TIEG1的降解是由泛素系统决定的，而SIAH1蛋白在瘢痕疙瘩中表达减少。提示我们瘢痕疙瘩中TIEF1 的高表达，可能是由于SIAH1蛋白表达减少所导致的；完成瘢痕疙瘩，增生性瘢痕与正常皮肤的蛋白组学研究。发现：瘢痕疙瘩和增生性瘢痕表达相同的16种蛋白；只在瘢痕疙瘩中表达的有11种不同蛋白；只在增生性瘢痕中表达的有9种不同蛋白。