长链非编码RNA BC015064：三阴乳腺癌侵袭的新机制

Due to the characters of low degree of differentiation, high heterogeneity, serious invasion and metastasis ability, high recurrence frequency, importantly the poor prognosis and ineffective rescue tactics, triple-negative breast cancer(TNBC) becomes one difficult trouble of breast cancer clinical treatment. BC015064 was specially over-expressed in TNBC, identified from differential lncRNA expression profile between TNBC tissue and non-TNBC tissue. Previous study showed that down-regulated expression of BC015064 in TNBC cells could inhibit the invasion ability of the invasive cells. On the other hand, bioinformatic analysis and experiment data indicated that tob1 could be a candidate target gene of BC015064. This study will confirm the role of BC015064, using overexpression and knock down strategies in the breast cancer cells which differentially express ER, PR, or Her-2, playing in the TNBC invasion progression by analyzing the cell behavior and molecular characteristics; subsequently clarify the underlying mechanism between BC015064 and gene tob1. Up to now, there was no report about the function and mechanism of lncRNA in regulating the TNBC invasion progression, and lncRNAs may open up a world in TNBC invasion research. This study may provide a new target for the gene targeted therapeutics of TNBC.

三阴乳腺癌由于肿瘤分化程度低、异质性高、侵袭及转移脏器能力强、复发率高，且缺乏有效的治疗手段，预后极差，是乳腺癌临床治疗的重大难题。BC015064是我们采用芯片技术筛选三阴乳腺癌与非三阴乳腺癌组织中差异非编码RNA时发现的、高表达于三阴乳腺癌组织中的lncRNA。前期研究发现，BC015064在三阴乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞中表达沉默可抑制肿瘤细胞的侵袭恶性；生物信息学及实验验证初步确定tob1为BC015064下游靶标。本研究拟取雌、孕激素受体或Her-2受体表达状态不同的乳腺癌细胞，采用过表达与沉默策略，从细胞行为学、分子特征等方面，明确BC015064在三阴乳腺癌侵袭过程中的功能；并以tob1为机制研究切入点，揭示BC015064可能的作用机制。本研究具有源头创新性，将有助于理解三阴乳腺癌侵袭力强的分子机制，可能为三阴乳腺癌的基因靶向治疗提供新靶点。

三阴性乳腺癌（TNBC）是乳腺癌中的一个重要亚型，浸润性较强，复发转移率高、生存时问短，缺乏有效的治疗方式。近年来，LncRNA被证实在肿瘤发生、发展中发挥重要的调控作用。通过高通量测序，筛选三阴乳腺癌与非三阴乳腺癌组织之间差异表达的LncRNA，发现上调LncRNAs880条，下调LncRNAs784条；基因功能聚类分析显示：差异表达的LncRNA参与细胞进程调节、细胞代谢进程及生物调节等；具有蛋白结合等功能；信号通路分析显示它们主要参与PPAR信号途径，蛋白酶体，卵母细胞减数分裂，细胞周期等信号通路；通过qRT-PCR技术，在13例三阴乳腺癌和39例非三阴乳腺癌中验证发现70条差异表达的LncRNAs；选取4株三阴乳腺癌细胞系及3株非三阴乳腺癌细胞系，qRT-PCR验证发现8条LncRNAs的表达模式与组织中的结果吻合；ROC曲线分析结果显示，其中6条LncRNA具有诊断意义。进一步研究，我们发现IGKV和LINC00052过表达抑制MCF-7的迁移，BC015064过表达促进MCF-7的迁移；通过CCK-8实验证实，IGKV抑制MCF-7的增殖，BC015064过表达刺激MCF-7的增殖；通过trans-well filter实验，IGKV抑制MCF-7的侵袭能力，BC015064过表达促进MCF-7的侵袭；通过FISH和核质分离-定量检测，我们发现IGKV和BC015064均主要分布于细胞核内；收集BC015064和IGKV5过表达的MCF-7细胞，进行高通量基因测序，结果显示：BC015064过表达后， 47个基因表达上调，32个基因表达下调；IGKV5过表达后，75条基因上调，140条基因表达下调。针对差异基因分析，BC015064过表达后，表达变化的基因主要参与调控转录、激素受体介导的信号转到等生物学进程，；IGKV5过表达后，差异表达基因主要参与外源性葡萄糖醛酸代谢、黄酮类化合物的代谢等过程；通过BSP 检测BC015064调控靶基因tob1的DNA 甲基化水平，结果发现BC015064过表达后，tob1的甲基化水平显著升高。以上结果表明，BC015064高表达与三阴性乳腺癌侵袭恶性程度高密切相关，并且能够通过tob1调控TNBC的侵袭能力，为TNBC的研究提供了可靠的数据，很可能为临床治疗TNBC提供有力的证据，也可能成为治疗TNBC的重要靶点。