腺病毒介导的新型抗炎分子的设计及抗炎作用的实验研究

病原微生物的裂解产物通过白细胞膜上TLR2和TLR4活化白细胞是引起全身炎性反应综合征的触发方式和关键步骤。研究表明，可溶性TLR2（sTLR2）和TLR4（sTLR4）可通过竞争性抑制白细胞膜上相应TLR2和TLR4的激活，从而阻断炎性介质的合成与释放。本项目在已克隆人TLR2和TLR4胞外区cDNA的基础上，将两种cDNA片断分别与一有效分泌信号肽的编码序列连接后，同时亚克隆于腺病毒表达载体，制备出可同时表达人sTLR2 和sTLR4的高滴度纯化腺病毒，继而用重组腺病毒转染的人白细胞，在体外和动物模型中观察腺病毒介导的sTLR2和sTLR4抑制LPS和BLP活化人白细胞、进而抑制炎性介质合成和释放的作用以及抗炎效果，为多种致炎成分引起的全身炎性反应综合征及多器官功能障碍综合征的防治性研究提供新的思路和新型制剂，也为今后研究TLR2 和TLR4信号通路提供重要工具。

目前，引起全身炎性反应综合征的触发方式和关键步骤之一是病原微生物的裂解产物通过白细胞膜上TLR2和TLR4活化白细胞引起的。本研究旨在探讨感染导致免疫损伤的机制,以及寻求相应的干预策略提供了新的实验依据。在前期工作基础上，我们将编码honeybee melittin 分泌信号肽的DNA序列的扩增，DNA连接及转化，腺病毒载体重组，并完成293细胞的转染、重组病毒的扩增、滴度测定及纯化。实验中通过用大肠杆菌K12感染正常人外周血的方法建立体外感染模型，在体外初步观察了可溶性TLR4/MD-2受体复合物能显著降低细菌感染后炎症介质IL-6、IL-8以及中性粒细胞表面CD11b、巨噬细胞表面CD80等的表达变化。还通过免疫小鼠成功制备抗人可溶性增殖诱导配体(sAPRIL)的多抗，结果证明该抗体可以在体外抑制sAPRIL促Raji和Jurkat细胞增殖活性。根据国内外研究现状，还进行了脓毒血症中TLR4、TLR2的表达与败血症病程相关性研究。结果提示存在TLRS耐受现象，即机体为了防止出现过强的炎症反应，进化出的一种通过下调炎症反应受体进行自我保护的机制，并在动物模型中的结果印证了上述机制。