清胰汤调控MTD-FPR/TLR9-器官损伤信号通路防治重症急性胰腺炎早期MODS作用机制

Triggering overwhelming inflammatory reaction by the pancreatic acinar mitochondria DAMPs(MTDs) may play an important role in the molecular pathogenesis of the early MODS of SAP. Therefore, blocking the pathway of MTD-MODS is vital for the therapy of SAP related early MODS. Qing-Yi-Tang has a good clinical application and basic research history, however, whether Qing-Yi-Tang ameliorates the early organ damage through blocking the pathway of MTD-MODS is not known. First,the present study will use the Na-Tc injection SAP rat model to investigate the effects of Qing-Yi-Tang on the serum MTD concentration and pathway of MTD-FPR-TLR9. Then, the study will examine the effects of Qing-Yi-Tang on the pathway of MTD-FPR-TLR9 in the organ damage model induced by pancreatic acinar MTD and mtDNA injection. In vitro, two kinds of inflammatory effector cells(PMN and RAW264.7) and one kind of damage-target cell (pulmonary microvascular endothelial cell) were stimulated by pancreatic acinar MTD and mtDNA and then the effects of Qing-Yi-Tang drug serum on the pathway of MTD-FPR-TLR9 were investigated. In general, the study combines the experiments of in vitro and in vivo to clarify whether the therapeutic mechanisms of Qing-Yi-Tang is throuth MTD-FPR-TLR9 pathway.

胰腺腺泡细胞线粒体DAMP分子（MTD）触发过强炎症反应是导致SAP早期MODS的重要分子机制，故阻断该途径对SAP早期MODS防治有重要意义。具有清热解毒、疏肝解郁及通里攻下功效的清胰汤对SAP及其MODS已有很好临床应用及基础研究，但是否通过干预此损伤途径尚无证实。本课题首先以牛磺胆酸钠注射法所致SAP大鼠模型研究清胰汤对血中线粒体MTD水平及受损器官MTD-FPR（甲酰肽受体）/TLR9信号途径的影响；然后研究清胰汤对提取的胰腺腺泡细胞MTD及mtDNA注射触发器官损伤模型中MTD-FPR/TLR9信号途径的影响；体外实验研究清胰汤药物血清对线粒体MTD及mtDNA刺激的2种炎性效应细胞（PMN、RAW264.7）及1种易受损靶细胞（肺微血管内皮细胞）MTD-FPR/TLR9途径的影响。通过体内、体外实验探讨清胰汤是否通过干预SAP早期胰腺腺泡细胞DAMP触发炎症信号途径起作用

重症急性胰腺炎(SAP)是临床重症之一, 起病急, 进展快, 尤其早期病情复杂多变,累及器官多, 并发症多, 病死率高。损伤相关分子模式(DAMP)，尤其是线粒体DAMP分子 (mitochondrial DAMPs, MTD) 炎症信号通路在重症急性胰腺炎及其器官损伤中起重要作用。线粒体DAMP分子触发过强炎症反应是导致SAP早期MODS的重要分子机制，故阻断该途径对SAP 早期MODS 防治有重要意义。具有清热解毒、疏肝解郁及通里攻下功效的清胰汤对SAP及其MODS已有很好临床应用及基础研究。主要研究内容包括：①清胰汤对急性重型胰腺炎器官损伤的治疗作用研究；②重型胰腺炎大鼠血浆线粒体DNA变化与器官损伤的关系及清胰汤的影响；③清胰汤对重型胰腺炎大鼠肺组织甲酰肽受体信号途径表达的影响； ④重型急性胰腺炎大鼠肺组织中甲酰肽受体（FPR1） 基因启动子区的CpG 岛的甲基化检测及清胰汤的影响。研究发现大鼠重型急性胰腺炎模型早期血中mtDNA水平升高、受损器官中MTD-FPR/TLR9 炎症信号分子表达显著升高，且与各脏器损伤程度呈正相关；清胰汤治疗可以显著减轻各脏器功能损伤程度，抑制MTD-FPR/TLR9 炎症信号通路的活化，证实了胰腺泡细胞线粒体DAMP 分子在触发SAP 早期多脏器功能损伤中的作用及清胰汤可通过干预MTD-FPR/TLR9 信号途径而起到对SAP 早期MODS 的防治作用。在近四年来随着该领域的研究新进展，课题组追踪该领域学术前沿，又在原设计方案的基础上增加了新的研究内容，如对甲酰肽受体甲基化调控与SAP炎症反应及器官损伤关系的研究，我们也进行了重型急性胰腺炎大鼠肺组织中甲酰肽受体（FPR1） 基因启动子区的CpG 岛的甲基化研究及清胰汤的影响，同时在研究中也发现SAP大鼠的渗漏综合征是造成大鼠早期死亡的重要原因，推测和甲酰肽受体（FPR）激活RhoA/ROCK介导的细胞骨架重构造成全身毛细血管通透性增加有关，也为下一步的研究提供了思路。