消癌解毒方对肿瘤细胞Toll样受体/核因子-κB通路的影响

消癌解毒方是在我国著名中医药专家周仲瑛先生"癌毒"理论指导下经长期临床实践的有效抗癌方药。经对周老临床治疗的1000多例病案资料分析，发现该方能提高中晚期恶性肿瘤患者近期临床疗效，减少化疗药物毒副反应；对肝癌细胞、宫颈癌细胞及S180腹水癌细胞最大抑瘤率分别为59.33、48.42、52.31％；具有抑制S180腹水癌小鼠肿瘤生长及降低VEGF、MMP2等作用。前期研究表明该方是一种发展前景非常好的抗癌药，但其在分子水平的抗癌机理还不清楚，本项目以Toll样受体/核因子-κB（TLRs／NF-κB）通路为靶点，通过体内、体外实验，以正常组、西药组及此通路特异性配体和阻断剂为对照，探讨该方对S180腹水癌模型鼠及肝癌SMMC-7721细胞此通路上游受体、中间环节及下游因子的影响，确认该方抗癌作用与此通路哪些环节有关，从分子水平进一步阐明该方抗癌机制，进一步探讨癌毒的生物学基础。

本课题选择Toll样受体/核因子-κB（TLRs／NF-κB）细胞信号转导通路作为治疗肿瘤的新靶点，从细胞因子表达的源头TLRs入手，运用细胞生物学、分子生物学技术，通过体内复制H22小鼠肿瘤模型，体外选用人肝癌SMMC-7721细胞株进行实验，用光镜、电镜进行形态学观察，流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡，ELISA法、western blot、实时定量PCR等测定靶分子表达，基因芯片检测基因表达谱，分析细胞信号转导通路，探讨消癌解毒方抗癌机制及对于肿瘤细胞TLRs/NF-κB通路关键环节TLR2、TLR4、NF-κB、髓样分化因子88（MyD88）、肿瘤坏死因子受体相关因子-6（TRAF-6）和癌毒密切相关的下游因子的干预作用，从基因转录和蛋白水平阐明消癌解毒方抗癌机制，寻找和确认新的药物作用靶点和可能的干预环节。同时通过对膜型基质金属蛋白酶(MT-MMPs)、黏附分子(CD44v6)等的检测，扩大对癌毒相关蛋白及细胞因子的检测范围。.研究结果表明：消癌解毒方对荷瘤动物模型的抑瘤作用明显，同时对体外培养的肿瘤细胞也有明显的抑制作用。消癌解毒方能诱导肿瘤细胞凋亡，对荷瘤小鼠外周血IL-6、VEGF、TGF-β、MMP2以及对肿瘤细胞TLRs／NF-κB通路上游受体TLR2、TLR4，中间关键环节NF-κB、MyD88、TRAF-6、下游因子MMP2、VEGF、TGF-β的表达都有影响，对肿瘤细胞的基因表达谱有调控，差异表达基因涉及细胞凋亡、血管生成、肿瘤生长、免疫等多个方面。消癌解毒方能调控TLRs／NF-κB信号通路,此外还能影响DNA损伤修复、细胞凋亡、肿瘤生长等其他多条细胞信号转导通路以发挥抗癌作用。.本研究为消癌解毒方的临床应用提供微观实验依据，同时也为进一步探讨消癌解毒方的分子机制，丰富中医“癌毒”理论的内涵打下基础。