LOC554202/miR31对隐球菌病患者中单核细胞的调控机制及其发病中的作用研究

The current treatment of cryptococcosis is relatively difficult, patients often accompanied by impaired immune function. Joint anti-infective immune intervention may improve curative effects. Studies have shown that, monocytes and type I IFN system in the antifungal immune response is of vital importance. Our research group pre-found that monocytes of patients with cryptococcosis LOC554202 expression significantly decreased and associated with the disease. Normal monocytes incubated with inactivated cryptococcosis may induced LOC554202 expression increases significantly. LOC554202 is miR - 31 host gene. This topic is intended to study the effects of LOC554202/miR-31 on monocytes immune function.It will provide the basis for immune intervention treatment of cryptococcosis.

目前对隐球菌病的治疗还较为棘手，患者常伴有免疫功能受损。通过免疫干预联合抗感染，可提高疗效。研究表明，单核细胞和I型IFN系统在抗隐球菌免疫应答中至关重要。本研究组前期发现，隐球菌病患者单核细胞LOC554202表达显著下调，并与病情相关；将正常单核细胞与灭活隐球菌共孵育，可诱导LOC554202表达显著上调。LOC554202是miR-31的宿主基因。本课题拟研究LOC554202/miR-31对单核细胞免疫功能的影响,将为免疫干预治疗隐球菌病提供依据。

本课题已按计划完成。已完成专业论文6篇，其中3篇SCI论文已见刊，1篇SCI论文已修回，还有2篇英文论文已投稿。研究主要结果如下：.1)构建pAd-LOC554202过表达载体并鉴定转染效率。通过生物信息分析，利用5’-RACE 和3’-RACE 等分子克隆手段确定LOC554202的全长基因，并克隆该基因；构建pAd-LOC554202过表达载体，电转染入隐球菌患者来源的单核细胞，经荧光显微镜所示，转染效率较好，可以用于下一步实验。.2)研究LOC554202对单核细胞吞噬，杀菌功能的影响。结果发现LOC554202能够显著增强单核细胞的吞噬杀菌功能。将各组单核细胞与荧光素标记的隐球菌共孵育后，用流式细胞术检测单核细胞吞噬率。与未转染组相比，发现LOC554202转染组单核细胞吞噬率增高（p<0.05）。.3)研究LOC554202对单核细胞极化及对T细胞分化的影响。结果显示LOC554202可促进单核细胞向M1极化，促进T细胞向Th1/Th17极化。在隐球菌病患者单核细胞中转入高表达的LOC554202后，使用灭活隐球菌刺激，发现与未转染组相比，其单核细胞显著向M1极化。ELISA结果表明M1型细胞因子TNF-α、IL-12显著增高（p<0.05）,M2型细胞因子IL-10显著下降（p<0.05）；通过实时荧光定量PCR法检测，发现M1型标志TNF-α、IL-12 mRNA水平显著升高，M2型标志Arg1、Ym1mRNA水平显著下降（p<0.05）。将转染组与未转染组单核细胞与CD4+CD45RA+细胞共孵育后，发现转染组Th1和Th17细胞比例显著上升，Th2细胞比例显著下降（p<0.05）。.4)研究LOC554202对单核细胞分泌细胞因子的影响。结果显示转染LOC554202后单核细胞分泌的细胞因子及趋化因子谱显著改变。其中TNF-α、IFN-γ、CCL1、CCL4、CCL7、CXCL1的mRNA水平增高，IL-4、IL-10、TGF-β的mRNA水平下降（p<0.05）。结果提示转染LOC554202能够促进单核细胞的抗炎能力。