CT抗原基因FATE/BJ-HCC-2在肝癌细胞转移中的作用和分子基础

FATE/BJ-HCC-2是我们采用生物信息学方法发现并验证的一种新的CT(cancer testis, CT)抗原基因(Genbank AY101182)。前期研究发现该基因的表达与肝癌的分化程度有关，具有促进肝癌细胞增殖的作用，在肝癌的发生发展过程可能有重要作用。为进一步研究它在肝癌细胞转移中的作用，我们拟采用SiRNA基因沉默、激光共聚焦显微镜、基因芯片、定量PCR等技术和建立的稳定转染FATE／BJ-HCC-2的肝癌细胞系单克隆细胞株进行体外和动物体内试验，观察FATE/BJ-HCC-2表达对肿瘤细胞骨架结构的影响，研究与FATE/BJ-HCC-2相互作用的基因和分子，分析FATE/BJ-HCC-2促进肿瘤细胞转移的分子机制，探讨FATE／BJ-HCC-2表达与肝癌细胞转移的关系, 进一步明确FATE/BJ-HCC-2的生物学功能, 对于揭示肿瘤发病机理和发生发展过程具有重要意义。

FATE/BJ-HCC-2是我们采用生物信息学方法发现的一种新的CT抗原基因。我们建立了稳定表达FATE／BJ-HCC-2的肝癌细胞系Bel-7402的单克隆细胞株。前期研究结果显示，FATE／BJ-HCC-2基因的表达具有促进细胞增殖能力。为进一步研究FATE/BJ-HCC-2在肝癌细胞转移中的作用，我们进行了以下研究并取得研究进展和成果：（1）我们采用激光共聚焦显微镜对稳定转染FATE/BJ-HCC-2的肝癌细胞系细胞及空质粒转染的对照组细胞的骨架结构进行了观察，发现两组肿瘤细胞的微管和微丝改变及细胞形态的差异，提示FATE/BJ-HCC-2表达促进肿瘤细胞侵润和转移存在细胞骨架结构基础。（2）采用基因沉默技术研究发现FATE/BJ-HCC-2表达能够增强肿瘤细胞的迁移和侵袭能力，且这种作用能够被特异性的SiRNA所阻断。阻断骨桥蛋白（OPN）和整合素连接激酶（ILK）表达后，FATE/BJ-HCC-2转染的肝癌细胞的侵袭和迁移能力也受到抑制。（3）利用基因芯片技术对表达FATE/BJ-HCC-2基因的5B4细胞和对照组MOCK细胞进行了人全基因组差异表达分析，上调差异表达基因共有821个，下调差异表达基因共有873个。从中筛选出一些与肿瘤转移及细胞骨架相关的分子。（4）采用免疫组化方法检测了FATE/BJ-HCC-2转染肝癌细胞和对照组Mock细胞及其在动物体内现成的肿瘤组织中与细胞骨架及转移相关基因蛋白的表达。发现促进肿瘤转移的相关分子如ILK、OPN、β-Catenin、MMP-2、MMP-9蛋白在FATE/BJ-HCC-2表达细胞及其在体内形成的肿瘤组织中的表达相对高于在Mock细胞及其在体内形成的肿瘤组织中表达；而抑制肿瘤转移的相关分子如E-Cadherin蛋白在FATE/BJ-HCC-2表达细胞中的表达则相对低于在Mock细胞中表达。以上研究结果提示FATE/BJ-HCC-2表达可能在肿瘤细胞的生长及转移过程中起重要作用。FATE/BJ-HCC-2表达影响了肝癌细胞的细胞骨架及转移相关基因蛋白的表达，FATE/BJ-HCC-2表达增强肿瘤细胞的侵袭和转移能力具有分子基础。该研究对于揭示FATE/BJ-HCC-2的生物学功能及肿瘤发病机理具有重要意义。我们按照课题计划完成了该课题的研究。