用黑曲霉糖化酶基因构建丝状真菌基因表达载体的研究

从黑曲霉糖化酶生产株及其诱变出发株分离糖化酶结构基因及其5调控区。经序列对比、构建调控区与报告基因的融合载体、黑曲霉转化、转化子报告基因表达水平测试等得出：糖化酶结构基因序列保守性对酶活性至关重要，调控区中9个部位碱基改变使转录水平提高一倍，trans调控改变使高产株转录水平提高5-8倍等结论。上述以生产株为材料并通过高低产株对比方式，在逐步阐明诱变导致菌株产酶提高的分子机制的同时，揭示糖化酶基因表达调控规律。这是独特的构思，所得结果丰富了真菌基因表达调控基础研究的信息库，也为丝状真菌分子育种提供直接指导。本项目还用糖化酶启动子和结构基因构建了丝状真菌表达分泌载体，可用于基因工程实践。本项目超计划完成。