卵泡刺激素受体介导的CA125靶向沉默及其与靶向化疗协同治疗卵巢癌

Ovarian cancer is the leading cause of gynecologic malignancies. Most patients are diagnosed at advanced stages and have only a 30% 5-year survival rate. Recent years the survival rate of patients with ovarian cancer has not been improved significantly. It could be a promising approach to develop therapeutics based on etiology and hormone environment of ovarian cancer. Cancer antigen 125 (CA125) is commonly expressed in ovarian cancer and has been used for early detection, distinguishing malignant from benign pelvic masses, monitoring response to treatment and detecting recurrence. Recent data indicate that CA125 contributes to the pathogenesis and progression of ovarian cancer, especially in peritoneal implantation and metastasis. To specific silence the expression of CA125, our study will develop follicle-stimulating hormone receptor (FSHR)-mediated MUC16 (CA125 coding gene) siRNA nanoparticule. The cytotocity, transfection efficiency and MUC16 silencing effect will be evaluated respectively. Moreover, the impact of specific CA125 silencing on ovarian cancer cell adhesion, implantation and metastasis will be detected in vitro and in vivo. To destroy tumor cells at the same time ovarian cancer implantation and metastasis are suppressed by CA125 silencing, this novel targeted complex will be administrated to animal model of ovarian cancer combined with FSH receptor-mediated paclitaxol nanoparticles. Tumor growth, peritoneal implantation and survival of animal models will be evaluated. Our study will provide evidence for a critical role of CA125 in ovarian cancer progression, and provide a strong experimental foundation for targeted therapy against ovarian cancer.

卵巢癌的治疗长期处于停滞不前状态，以卵巢癌发生发展的分子机制和特殊激素环境为基础，寻找有效治疗方法可能具有更好的前景。研究发现，作为卵巢癌诊断和随访标志物的癌抗原125（cancer antigen 125, CA125）是卵巢癌发生发展中的一个重要靶点，尤其是在腹腔种植转移中具有关键作用。本研究拟借助卵泡刺激素受配体的介导，在提高靶向性的基础上，制备以CA125编码基因MUC16 的siRNA为弹药，纳米材料为载体的靶向药物，将MUC16 siRNA选择性导入卵巢癌细胞，沉默MUC16表达，考察CA125在体内外环境下对卵巢癌细胞粘附、种植和转移的影响，并结合FSH受体介导的靶向化疗药物，在卵巢癌细胞种植转移受到抑制的同时杀灭肿瘤细胞。这项研究有利于人们深入理解CA125的生物学功能，而且能够通过双重靶向提高CA125拮抗策略对卵巢癌的杀伤作用，为肿瘤靶向治疗研究提供新思路。

卵巢癌是妇科常见的恶性肿瘤之一，其传统治疗方法未取得明显效果，死亡率稳居妇科恶性肿瘤榜首。因此，我们把目光转移到卵巢癌的分子靶向治疗。.本课题是通过FSH受体介导作用，多聚阳离子共聚物聚乙烯亚胺（PEI）连接非离子亲水性基团聚乙二醇（PEG）为纳米级复合物载体，设计并制备以CA125编码基因MUC16 的shRNA为弹药，沉默MUC16的表达，考察CA125在体内及体外环境下对卵巢癌细胞增殖、种植和转移的影响。为肿瘤靶向治疗研究提供新思路。.首先，在众多卵巢癌细胞中筛选出高表达FSHR、MUC16的卵巢癌细胞HO8910；设计并合成筛选出MUC16的shRNA作为体内外细胞实验中的基因药物。其次，合成mPEG-PEI（mPP）、D(FTCTKQIKPRAPDKYVLDRTY)-PEG-PEI(D-F-PP)纳米复合材料，包裹质粒后检测zeta电位（5~14mV）、粒径（在140nm~210nm之间），对比不同接枝量及N/P比对纳米复合物的毒性及转染效率的影响，后确定5%PEG接枝量及N/P比12的纳米复合物进行后续研究。再次，在体外实验中，用包裹MUC16 shRNA荧光质粒的纳米基因复合物体外转染细胞24小时（转染效率为30~40%）。通过Transwell实验及RTCA细胞增殖实验证明FSHR多肽修饰的纳米靶向复合物，能够明显抑制卵巢癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力。最后，用卵巢癌细胞株HO8910建立裸鼠皮下种植瘤模型，成瘤后随机分为PBS、mPP、D-F-PP三组。每组分别给予不同纳米材料包裹的MUC16 shRNA质粒对荷瘤小鼠给药，观察药物对肿瘤生长体积及小鼠体重的影响，评价药物抑瘤率及药物毒性。结果提示对照组皮下瘤体积较大，而经过mPP、D-F-PP纳米基因复合物治疗实验组裸鼠皮下瘤体积均较小，差异具统计学意义（P<0.01）。PP、D-F-PP抑瘤率为26.3%， 58.5%。各组荷瘤裸鼠的体重无明显减轻。. 本文建立的卵巢癌靶向递药系统，增加了基因药物体内应用的可行性，提高了药物在病变组织的分布，降低药物对无关组织的毒副作用。除了本研究使用的模型药物MUC16shRNA外，亦可选择其他与卵巢癌发生发展密切相关的分子作为靶标，用于抗肿瘤治疗。本文为卵巢癌的治疗研究提供了新的策略及思路，并为靶向治疗和纳米药物的临床应用奠定了实验基础