重组人颗粒溶素坡缕石免疫磁性纳米粒靶向治疗胃癌的研究

Granulysin have antibacterial, antiviral and anticancer effect. Palygorskite has crystal morphology of fibrous, ratio of length to diameter is large, its structure belongs to the one-dimensional nano material, is a very good preparation of polymer - inorganic nanocomposite inorganic phase, is a natural non-toxic silicate mineral. immune magnetic nanoparticles. this study was to explore the role of immune magnetic nanoparticles against gastric cancer. immune magnetic nanoparticles is made up of recombinant human granulysin monoclonal antibody, modified natural palygorskite and magnetic material Fe3O4. It is build by means of electrostatic interactions and the surface grafting. This study to explore the mechanism of action of recombinant human granulysin and palygorskite by studying their Structure-Activity Relationship and controlled release behavior. this study also explore antitumous effects of immune magnetic nanoparticles. This study provides the foundation for the load of human recombinant granulysin palygorskite in anti-tumor, anti-inflammatory, antiviral therapy.

颗粒溶素具有抗菌、抗病毒及抗肿瘤作用。坡缕石是纤维状晶体形态,长径比很大，其结构特征属于一维纳米材料,是一种很好的制备聚合物-无机纳米复合材料的无机相，属于天然硅酸盐矿安全无毒。本研究拟通过静电作用和表面接枝的方式，制备以重组人颗粒溶素单克隆抗体为免疫分子，改性的天然坡缕石为骨架材料， Fe3O4为磁性材料的免疫磁性纳米粒对抗胃癌的研究。通过研究其构效关系对颗粒溶素的负载、控释行为；抑制肿瘤效果，揭示重组人颗粒溶素坡缕石免疫纳米粒的作用机理，加深对载体结构、性能与颗粒溶素单克隆抗体间关系的理解。最终为负载人重组颗粒溶素坡缕石在抗肿瘤、抗炎、抗病毒治疗领域的应用奠定基础。

摘要：颗粒溶素是一种由人类自然杀伤细胞和细胞毒性T淋巴细胞分泌的蛋白质，9kDa颗粒溶素的蛋白对肿瘤细胞、革兰氏阳性和阴性细菌、真菌和寄生虫具有广泛的细胞毒性，但特异性较低。本研究通过对GNLY的生物信息学分析，明晰了其理化性质、跨膜区域、信号肽、定位、蛋白质二级和三级结构、蛋白质功能、同源性和系统发育树等信息；通过原核和真核表达、纯化获得GNLY9K-GST和GNLY9K-His蛋白；通过细胞和裸鼠实验，证明GNLY9k-His具有杀伤人胃癌细胞株、人肝癌细胞株和人非小细胞肺癌细胞株肿瘤细胞，并通过上调caspase3凋亡酶和下调血管内皮生长因子双重作用抑制肿瘤组织增殖的功能。通过溶剂热反应在纳米材料HNT表面吸附四氧化三铁形成Fe3O4@HNTs，然后通过将海藻酸纳（SA）-GNLY9K和分散的Fe3O4@HNTs溶胶凝胶反应获得SA/Fe3O4@HNTs-GNLY9K纳米磁性微球。傅立叶变换红外光谱和扫描电镜对纳米复合微球进行了鉴定，此外，对SA浓度，SA和Fe3O4@HNTs的比例和六水三氯化铁与HNTs的比例影响GNLY9K负载和可控释放行为进行了系统研究，找到了最适条件。在模拟人工胃肠环境下，SA/Fe3O4@HNTs-GNLY9K十分稳定，而在pH7.6的环境中开始释放，说明该纳米磁性微球具有较好的酸稳定性。