水环境中肠道病毒灭活分子机理研究

本项目将在前期研究的基础上，采用Long-overlapping PCR技术、长探针与短探针交替Northern Blotting技术，并结合病毒细胞感染模型，对常用饮水消毒剂-氯作用于指示微生物-脊髓灰质炎病毒基因组5'非编码区的敏感靶点进行精确定位，发现氯灭活脊髓灰质炎病毒的最佳靶点；然后，观察其他常见饮水消毒剂或方法(二氧化氯、氯胺、臭氧、紫外线等)对水中常见病毒(甲型肝炎病毒、柯萨奇病毒、诶柯病毒、轮状病毒)基因组的最佳作用靶点，以发现消毒剂灭活病毒基因组的通用最佳靶点；最后，利用基因敲除病毒感染模型(人造病毒)技术确证消毒剂灭活病毒的通用最佳靶点，形成消毒剂灭活病毒基因组的最佳靶点假说，丰富和完善水中病毒灭活的分子机理学说。同时，建立基于最佳靶点假说的饮水消毒效果分子评价技术及新型饮水生物消毒剂研究技术平台。

本课题采用Long-overlapping PCR 技术、长探针与短探针交替Northern Blotting 技术，并结合病毒细胞感染模型，对氯、二氧化氯、臭氧、紫外线等消毒方法作用于脊髓灰质炎病毒（PV）、甲型肝炎病毒(HAV)、肠道病毒71型(EV-71)、轮状病毒(HRV)、肠道腺病毒41型(Ade41)、诺如病毒(NoV)基因组的敏感靶点进行定位，发现常用消毒剂（氯和二氧化氯）灭活肠道病毒（PV, EV71，HAV）优先作用靶点位于病毒基因组的5’非编码区；而其他通过肠道传播的病毒（HRV，NoV，Ade41）则无这一规律，最终形成了消毒剂灭活肠道病毒基因组的最佳靶点假说，丰富和完善水中病毒灭活的分子机理学说。同时，还建立了基于最佳靶点假说的RT-PCR和荧光定量PCR等饮水消毒效果分子评价技术，这些技术不仅灵敏度高、特异性强、重复性好，且与细胞培养法结果一致；最后，建立的基于消毒剂灭活病毒最佳靶点的抗脊髓灰质炎病毒感染的RNA干涉（siRNA）方法以及“先二氧化氯后氯低浓度消毒方法”为新型饮水消毒技术研究奠定了基础。