MiR-17/ASK1介导的单核巨噬功能调控在AMSC-Exo治疗肝衰竭中的作用及机制研究

The liver failure causes high rate of death seriously threatens health of the patients. So it is crucial to find new targets and methods to reduce mortality. Our team found that by injecting the AMSC-Exo in the LPS/D-GalN induced liver failure mice via tail vein, both of the macrophage infiltration and inflammatory factor secretion decreased, resulting in less mortality rate. Further analysis shows that the miR-17 was high expression in the AMSC-Exo, which could inhibit post transcriptional regulation of gene ASK1, resulting less cells apoptosis, recruitment factor and inflammatory factor secretion. So this project is intended to study the relationship between the ASK1 and the function regulation of different source of macrophage; and to understand whether the miR-17 in AMSC-Exo could affect the kupffer cells apoptosis, recruitment factor and inflammatory factor secretion by inhibition the expression of ASK1; or whether the miR-17 could affect the formation and function molding of peripheral mononuclear macrophage. Finally to clear that the key role of miR-17 in treatment of liver failure with AMSC-Exo, and to find the best time windows for injection the AMSC-Exo, which could provide basis for future clinical application.

肝衰竭病死率高，严重威胁患者的健康。因此探寻有效的治疗新靶位和新方法来降低病死率十分关键。本团队发现AMSC-Exo尾静脉输注LPS/D-GalN诱导的肝衰竭小鼠后，其可抵达肝脏巨噬细胞，并减少肝脏炎性细胞浸润和炎症因子分泌，死亡率显著降低。进一步分析发现AMSC-Exo中高表达miR-17，而它与控制细胞凋亡，招募、炎性因子分泌相关的ASK1存在靶向调控关系。因此本项目拟通过研究了解，在肝衰竭进程中ASK1表达是否与不同来源的肝脏巨噬细胞的功能调控有关；AMSC-Exo中miR-17是否可通过靶向抑制ASK1影响Kupffer的凋亡，炎性、招募因子分泌，是否可影响MoMs的形成和功能塑造。最终明确AMSC-Exo中miR-17在肝衰竭治疗中的作用，以及通过分析它在不同来源肝脏巨噬细胞中分别起到的作用探索肝衰竭治疗的最佳时间窗口，为今后临床应用AMSC-Exo输注治疗肝衰竭提供理论依据。

肝衰竭病死率高，严重威胁患者健康。因此探寻有效的治疗新靶位和新方法来降低病死率至关重要。本项目研究显示AMSC-Exo尾静脉输注LPS/D-GalN诱导的肝衰竭小鼠后，可以减少肝脏炎性细胞浸润和血清ALT、AST和炎症因子水平，并有效缓解肝组织损伤，降低肝衰竭模型小鼠死亡率。并发现AMSC-Exo中高表达miR-17，它可以直接靶向调控与细胞凋亡，单核招募、巨噬炎性因子分泌等相关的ASK1分子。进一步研究显示，肝衰竭进程中ASK1 与肝脏巨噬细胞的功能调控与肝脏炎症结局密切相关。ASK1激活会诱导巨噬细胞中JNK介导的线粒体异常，从而导致线粒体损伤和线粒体ROS释放增加，进而通过JNK介导的线粒体逆行通路导致细胞死亡和炎性细胞因子的大量分泌，最终导致肝衰竭。另外，明确了miR-17在AMSC-Exo 治疗肝衰竭中的作用。并基于该特点，设计并构建了特定ncRNA修饰的AMSC-Exo。修饰后的AMSC-Exo可更为有效地促进巨噬细胞抗炎修复表型的分化，抑制巨噬细胞炎症因子分泌及其程序性坏死，从而更为有效地缓解肝衰竭。最后，明确了miR-17-ASK1轴在AMSC-Exo肝衰竭疗效中的调控机制。发现miR-17可以靶向ASK1并抑制其表达，而ASK1的抑制可显著下调JNK介导的线粒体功能损伤，进而干预巨噬细胞的过度激活和功能表型塑造。并由此提出以ASK1介导的JNK活化作为AMSC-Exo肝衰竭治疗时间窗的指针。上述研究有助于进一步了解miR-17/ASK1介导的AMSC-Exo肝衰竭免疫治疗新机制，并为基于干细胞来源外泌体的肝衰竭治疗提供实验依据。