DBC2抑癌基因对乳腺癌干细胞恶性表型逆转作用的研究

本研究拟采用免疫磁珠分选技术（MACS）和荧光素标记流式细胞术分离鉴定乳腺癌组织、乳腺癌细胞系中CD44+/CD24-/low的乳腺癌干细胞和CD44-的乳腺癌细胞，并建立乳腺癌干细胞系和裸鼠移植瘤模型；同时构建含乳腺癌抑癌基因DBC2正常和突变体DBC2m的pIND载体，克隆其基因全长cDNA，并转染乳腺癌干细胞系和乳腺癌细胞；分别应用免疫荧光显微镜观察细胞形态改变，MTT试验、Brdu掺入、PCNA标记、FCM测定细胞增殖动力，双层软琼脂克隆形成试验和裸鼠移植瘤观察细胞体内外成瘤性和对荷瘤裸鼠的抑制作用，分析DBC2抑癌基因对乳腺癌干细胞恶性表型的影响，以期证实DBC2在逆转乳腺癌干细胞恶性表型中的作用，进一步揭示DBC2在乳腺癌发病中的分子机制，为乳腺癌治疗提供新的分子靶点，探讨以DBC2为分子靶点的基因治疗的可行性，为乳腺癌干细胞及其新的治疗研究奠定理论基础。