联合应用单磷酸酰脂质（MPL）的WapA防龋DNA疫苗增强粘膜免疫反应的效应及其机制研究

抗变形链球菌DNA疫苗能够有效地控制龋病的发生和发展，具有安全、可靠、生产方便等优点，是防龋疫苗研制的重要方向。如何提高经粘膜途径接种防龋DNA疫苗的免疫效果、增强抗变形链球菌特异性IgA的产生是防龋DNA疫苗研制的关键。本课题利用单磷酸酰脂质(MPL)作为粘膜免疫佐剂，通过增强粘膜免疫反应和树突状细胞的抗原摄取加工能力增强Wap防龋DNA 疫苗的防龋效果。通过构建WapA真核表达载体，检测其在真核细胞中的表达及其对树突状细胞及B细胞功能的影响。以壳聚糖纳米粒子包裹的WapA质粒联合应用MPL佐剂通过粘膜途径，检测该免疫方式诱导特异性抗体的水平与强度、对免疫局部和粘膜相关淋巴组织的细胞组成与微环境的影响，评价该疫苗的防龋效果，探讨MPL增强防龋DNA 疫苗粘膜免疫反应的可能机制，为增强防龋DNA 疫苗诱导的粘膜免疫反应进而提高疫苗的防龋效果提供新的思路和方法，为免疫防龋理论提供新的证据。

龋病是一种全球高发的感染性疾病，严重影响人类的健康和生活质量。变形链球菌因介导菌斑的形成而被认为是主要的致龋菌。众多研究表明，抗变形链球菌DNA疫苗能有效诱导粘膜产生特异性sIgA抗体，抑制变形链球菌与牙面的粘附，从而减少龋病的发生。有研究表明变形链球菌壁相关蛋白A（WapA）在龋病的进展中起了重要作用，我们选择了变形链球菌UA159中的wapA全长基因片段构建了pVAX1-wapA质粒。为了提高粘膜途径接种防龋DNA疫苗的免疫效果，增强粘膜特异性sIgA的产生，我们利用壳聚糖纳米材料包裹pVAX1-wapA，.pVAX1-wapA/cs的粒径约282nm左右，粒径分布范围窄，zeta电位为19.3mv左右。在体外的真核细胞转染实验中，pVAX1-wapA，pVAX1-wapA/cs，均可检测到wapA基因的表达。单磷酸酰脂质（MPL）A能活化抗原递呈细胞，诱导产生促炎因子，以其为佐剂能增强抗体水平。在动物体内实验中，pVAX1-wapA/cs所引起的特异性抗体水平与其他对照组相比有着显著性升高，实验结果证实了该DNA疫苗首次免疫一周后即可成功刺激小鼠产生免疫反应，可以有效诱导机体产生免疫应答，相应抗体的产生。MPL-WapADNA疫苗增强防龋疫苗的可能机制，也在本课题里进行了探讨。. 该课题按照原定研究计划顺利进行，申请专利一项，同时培养研究生一名。目前申请人已将大部分结果整理成文，即将投出。