地锦草提取部位对红色毛癣菌CYP51酶活性及蛋白酶MEP、SUB基因表达的影响

地锦草是维吾尔医常用药材，临床上用于治疗头癣、体癣、足癣、花斑癣等疾病，疗效显著。本课题组研究发现，地锦草乙醇提取物及其复方制剂具有显著地抑制皮肤癣菌作用。目前，课题组已采用大孔吸附树脂洗脱从地锦草乙醇提取物中分离了6个部位，按照NCCLs M38-A方法进行体外药敏试验，从中筛选出了最佳提取部位(黄酮含量为42%)。在此基础上，本项目采用ELISA、Western Blot、GC-MS、HPLC、RT-PCR等技术，从红色毛癣菌细胞膜羊毛甾醇14α-去甲基化酶（CYP51）活性及甾醇类物质合成与代谢(CYP51酶的底物和产物)、基质金属蛋白酶MEP（1～5）和SUB基因表达等方面，研究地锦草提取部位抗皮肤癣菌的作用机制。为开发出抗真菌作用强、作用靶点明确、作用机制清楚的抗浅表真菌维药新药提供研究基础。

研究背景：地锦草临床上用于治疗皮肤癣菌病，疗效显著，但其活性提取部位的抗真菌作用机制不清楚。因此，本项目对地锦草活性提取部位作用机制进行深入研究，为其新药开发提供线索。内容：目采用ELISA、HPLC、RT-PCR等技术，从红色毛癣菌细胞膜羊毛甾醇14α-去甲基化酶（CYP51）活性及甾醇类物质合成与代谢(CYP51酶的底物-羊毛甾醇和产物-麦角甾醇)、基质金属蛋白酶 MEP（1～5）和SUB基因表达等方面，研究地锦草提取部位抗皮肤癣菌的作用机制。结果:与对照组比较，随着药物浓度（EHAC 32～128 μg/mL）的升高，导致红色毛癣菌中麦角甾醇含量明显下降（P＜0.01），羊毛甾醇蓄积，但给药组羊毛甾醇含量均低于空白菌，可能是由于药物抑制了角鲨烯环氧化酶的活性，从而导致羊毛甾醇合成受阻所致。EHAC可使红色毛癣菌中CYP51酶的含量降低，EHAC 32 μg/mL能使红色毛癣菌中CYP51酶含量降低（P＜0.01），且有明显的剂量依赖性。EHAC组与空白对照组比较，红色毛癣菌菌丝中MEP1-5与SUB基因相对表达量显著减少，并且有一定的剂量依赖性，其中对SUB作用最强，高剂量组对SUB抑制率为81%，对MEP1-5的抑制率分别为47%、67%、32%、48%、22%；TBF可显著降低红色毛癣菌MEP 2-5与SUB 1基因相对表达量。结论：EHAC可通过抑制红色毛癣菌细胞膜CYP51酶的活性，影响其麦角甾醇生物合成途径，从而破坏细胞结构。另外，EHAC可抑制红色毛癣菌MEP和SUB基因表达，干扰红色毛癣菌感染过程，起到抗真菌作用。本研究为地锦草抗浅表真菌新药开发提供了研究基础。取得成果：通过项目的开展，发表论文4篇，培养硕士研究生1名，在读硕士研究生1名，获得新疆科技进步一等奖1项，新疆药学会科学技术奖二等奖1项。