黄芪多糖对卵巢癌休眠肿瘤细胞的外泌体调控机制研究

After treatment with standardization，tumor remains dormant tumor cells, dormant tumor cells by means of exosomes change the surrounding environment and form the "soil" of tumor recurrence and metastasis.The studies found that astragalus polysaccharide can improve body environment, reverse tumor cells in the immune evasion, promote the tumor cells rest, prevent dormant metastases in body and improve the long-term survival of cancer patients.This topic proposed the establishment of a high transfer people ovarian cancer dormancy mice model of fluorescent tags and give astragalus polysaccharides intervention, real-time observation by fluorescent protein in vivo imaging system state of dormant tumor cells, analyse and compare the exosomes secreted by tumor cells under different interventions, expounds its relationship with tumor angiogenesis and immune regulation, and then study the exosome regulatory mechanism of astragalus polysaccharides reverse tumor cell immune escape, promote the dormant tumor cells, prevent tumor recurrence and metastasis ,for its clinical application and further research of promote tumor dormancy drugs provide the basis .

肿瘤经规范化治疗后仍存在休眠肿瘤细胞，休眠肿瘤细胞通过外泌体分泌改变周围微环境，形成肿瘤复发和转移的“土壤”。研究发现，黄芪多糖可改善机体内环境，逆转肿瘤细胞免疫逃逸，促进肿瘤细胞休眠，阻止体内隐匿性转移，提高肿瘤患者的远期生存率。本课题拟建立荧光标记的高转移人卵巢癌休眠小鼠模型并给予黄芪多糖干预，通过荧光蛋白活体成像系统实时观测休眠肿瘤细胞状态，并对不同干预措施下肿瘤细胞分泌外泌体进行分析和比较，阐明其与肿瘤血管生成和免疫调节的关系，进而研究黄芪多糖逆转肿瘤细胞免疫逃逸，促进肿瘤细胞休眠，阻止肿瘤复发和转移的外泌体调控机制，为其临床应用及进一步研究促肿瘤休眠药物提供依据。

卵巢癌经规范化治疗后仍存在休眠肿瘤细胞，休眠肿瘤细胞通过外泌体分泌改变周围微环境，形成肿瘤复发和转移的“土壤”。本课题建立荧光标记的高转移人卵巢癌休眠小鼠模型并给予黄芪多糖干预，通过荧光蛋白活体成像系统实时观测休眠肿瘤细胞状态，并对不同干预措施下各组外泌体、蛋白及相关指标进行分析和比较。我们构建了含EGFP，LUC双报告基因的荧光标记的细胞株SKOV-3/Luc。建立了荧光标记的高转移人卵巢癌休眠小鼠模型。通过用活体成像仪进行休眠细胞荧光成像检测发现与对照组相比，黄芪多糖组裸小鼠肿瘤休眠细胞光子量均明显降低，差异具有统计学意义（P＜0.05），验证了黄芪多糖具有促进和维持卵巢癌细胞休眠状态的作用。与对照组相比黄芪多糖组bFGF、VEGF、MVD均显著降低，差异具有统计学意义（P＜0.05），说明黄芪多糖可能通过抑制肿瘤新生血管的形成，从而抑制肿瘤分化、浸润、转移。黄芪多糖组CD4、CD8细胞数目均明显增高，差异具有统计学意义（P＜0.05），说明黄芪多糖对调控免疫有一定的作用。检测各组外泌体中MicroRNA指标，发现黄芪多糖具有升高外泌体中miRNA-9、 miRNA-140、 miRNA-145的作用，与对照组比差异具有统计学意义（P＜0.05），说明黄芪多糖可通过外泌体将其携带的miRNA传递至受体细胞，来调控肿瘤的增殖、凋亡及转移过程，从而参与调控促进肿瘤细胞休眠，阻止肿瘤的复发和转移。通过双向电泳及质谱分析检测各组休眠裸鼠组织的蛋白，发现了差异蛋白包括调控癌细胞增殖、凋亡、分化的Actin、Keratin15.14.10。还有调节自噬、抗氧化、参与机体免疫、抑制血管生成等生物学功能功能的蛋白HSP25、HSP70、ribosomal protein。分析差异蛋白功能，发现黄芪多糖可能通过调控细胞周期和凋亡，调节机体免疫、影响血管生成、自噬等多条信号通路抑制肿瘤细胞的增殖和促进凋亡，从而抑制肿瘤的发生发展和侵袭转移，维持和促进肿瘤细胞休眠。体外实验部分与对照组比较，黄芪多糖对SKOV-3细胞的增殖有抑制作用，同时可以使SKOV-3细胞的侵袭能力降低、凋亡增多。后期我们将对miRNA相应下游靶向基因进行系统检测，掌握其发挥生物学作用的直接靶基因，探讨两者相互调控关联及相关通路。