P2Y2受体在雌激素依赖型乳腺癌中的作用及机制研究

临床现象表明雌激素可以提高罹患乳腺癌的风险。P2Y2受体属于G蛋白耦联受体，与癌症的发生发展有关，但其对乳腺癌的作用不明。近来发现，雌激素可以通过作用于G蛋白耦联受体进而促进肿瘤细胞的增殖和转移。因而我们设想，P2Y2受体在雌激素依赖的乳腺癌中可能起重要作用。预实验研究发现P2Y2受体激活时对MCF-7细胞有抑制作用，P2Y2受体拮抗剂促进雌激素对MCF-7细胞的增殖作用，雌激素显著抑制MCF-7细胞P2Y2受体的表达，提示P2Y2受体参与调节雌激素对乳腺癌发生和发展的作用。本项目拟采用细胞生物学、分子生物学，免疫钙荧光成像等手段，重点探讨P2Y2对雌激素依赖型MCF-7细株胞增殖、凋亡及转移的作用，以及P2Y2受体参与雌激素对肿瘤细胞增殖以及肿瘤形成中的作用及其中的机制，从而为进一步阐明雌激素在乳腺肿瘤的产生和发展中的作用和分子机制，寻找新兴的抗肿瘤药物提供理论依据。

雌激素可以促进乳腺癌细胞的增殖。在不同类型肿瘤中，拮抗P2Y2受体有促进和抑制肿瘤增殖的双重效应。本文发现P2Y2受体在ERα阳性的MCF-7细胞和ERα阴性的MDA-MB-231细胞上均有表达。17β-E2可以促进MCF-7的增殖作用，且这种作用可以被ER拮抗剂ICI 182,780, ERα特异性拮抗剂MPP和ERα siRNA所拮抗，而ERβ拮抗剂PHTPP和ERβ siRNA 没有这种效应。UTP可以抑制MCF-7和MDA-MB-231细胞的增殖作用，且这种作用可以被P2Y2受体选择性拮抗剂苏拉明所阻断。进一步研究发现17β-E2可以在mRNA和蛋白水平分布下调P2Y2受体的表达。同样，这种作用可以被ER拮抗剂ICI 182,780和MPP所拮抗，而PHTPP和ERβ siRNA不能拮抗。雌激素和PPT可以显著降低ERK和Akt的磷酸化水平，且显著增加这两条通路下游的转录因子CREB的磷酸化，而且ERK拮抗剂U0126和Akt拮抗剂LY294002可以显著逆转这种效应。UTP可以导致MCF-7细胞内钙释放。提前给予雌激素处理24小时可以显著降低UTP诱导的内钙释放，且这种效应可以被ICI 182,780和MPP所拮抗，而PHTPP没作用。总结：雌激素可以通过ERα受体，促进ERK和Akt磷酸化，激活其下游转录因子CREB，进而下调P2Y2受体的表达，并降低P2Y2受体介导的内钙释放，进而促进MCF-7细胞的增殖。