基于IFN-α/β介导的JAK-STAT信号通路研究麻杏石甘汤抗甲型流感病毒有效部位群的作用机制

甲型流感病毒是人和动物流感的主要病原体。抗原变异使普通疫苗效果受到影响。化学药物又因耐药株出现而不断有病人死亡事件报导。中医药防治流感历史悠久、疗效稳定。本项目以有效部位群为突破口,以IFN-α/β介导的JAK-STAT通路为切入点，研究麻杏石甘汤抗甲型流感病毒作用与机理。研究内容有:①提取、组合麻杏石甘汤不同部位而形成系列部位群，制备含药血清，以甲型流感病毒细胞感染模型筛选有效部位群，明确其配伍原理；②以甲型流感病毒感染(刺激)的单核/巨噬细胞为受试对象，研究有效部位群对IFN-α/β介导的JAK-STAT通路主要"元件"表达、活化等水平的调控作用，明确调控靶点；③建立甲型流感病毒肺部感染动物模型，探索有效部位群对IFN-α/β介导的JAK-STAT通路的调控作用与其抗流感病毒效应的相关性。目的是从有效部位群层次上，明确麻杏甘汤抗甲型流感病毒的物质基础及部分作用机理，为其应用提供支持。

1.以4因素2水平的正交试验组合麻杏石甘汤各部位而形成16个部位群，应用甲型流感病毒鼠肺部适应株感染小鼠建立感染模型研究各部位群抗流感病毒的作用。通过检测与分析给药后各组动物体重、死亡率、肺指数、胸腺指数、脾指数、肝指数、心脏指数等指标的变化,筛选出了该方抗甲型流感病毒效应明显的2个有效部位群,为后续研究奠定了基础。.2.以甲型流感病毒鼠肺部适应株感染小鼠建立的感染模型为受试对象，综合应用ELISA技术、实时荧光PCR技术、Western Blotting技术等研究了有效部位群对IFN-α/β介导的JAK-STAT通路“激活物”（IFN-α、IFN-β）、通路中游“元件”(JAK1、TYR2、STAT1、STAT2、STAT3、IRF-8)、通路下游“元件”(IL6、TNFα)分泌水平、基因与蛋白表达水平的影响。结果表明：2个有效部位群对流感病毒感染小鼠血清中IFNα、IFNβ、IL6、TNFα含量水平均有明显的调节作用，对流感病毒感染小鼠肺组织JAK1、STAT2、MyD88、IRF8基因和蛋白表达水平有不同程度的调节作用。.3.以该通路靶点指标的基因表达水平和蛋白表达水平为切入点，研究麻杏石甘汤及其2个有效部位群对IFN-α/β介导的JAK-STAT信号通路的调控作用与其抗甲型流感病毒效应的相关性，结果表明：麻杏石甘汤及其有效部位群的抗甲型流感病毒作用与其对IFNα、IFNβ含量水平及其所介导的JAK-STAT信号通路中的STAT2、IRF8基因表达水平和蛋白表达水平的调节作用有关。.同时，项目组开展了系列拓展研究。结果表明：①在治疗给药与预防给药方式中，麻杏石甘汤体外对A型流感病毒感染的MDCK细胞活性与超微结构有改善作用。②麻杏石甘汤抗流感病毒的作用机制可能还与其抑制神经氨酸酶活性，阻止病毒增殖有关。麻黄在该方抗流感病毒作用中有重要地位。③药物煎煮方法影响复方的抗流感病毒效应，麻黄先煎煎剂抗流感病毒作用优于四味药同煎煎剂。.本项目在国内核心刊物等发表论文10篇，全国性会议报告3人次，省级会议报告2人次。获省级优秀硕士论文奖1项，获湖南省级第14届自然科学优秀论文二等奖1项，参加国家级学术会6人次，省级学术会16人次，培养硕士研究生4名、省优秀实验教师1人、省科技创新团队带头人1人。