构建了库容量为1.7×10(8)的鼠源噬菌体单链抗体库,以血纤维蛋白为选择剂淘选到特异抗体。模拟体内抗体后成熟过程,将特异抗体基因经DNA改组(Shuffling),再从改组库中淘选出高亲和力的特异抗体。对可溶性抗体进行了分离和鉴定。将血纤维蛋白特异单链抗体基因与尿激酶原活性区(144-411)基因片段融合,插入表达载体pET21a,对表达的嵌合体分离并鉴定,结果表明它具有与血纤维蛋白结合以及激活纤溶酶的活性。为使鼠源噬菌体抗体人源化,通过计算机搜索得到已知序列最相近的人源抗体,据此替换掉鼠源血纤维蛋白特异抗体中的构架序列,再次淘选出血纤维蛋白高亲和力的单链抗体,与尿激酶(32kD)融合,经高效表达和分离纯化,证明所构建导向溶栓剂符合预期要求。
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数据更新时间:2023-05-31
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