饲料中氧化鱼油导致大口黑鲈脂肪肝发生的机理及控制研究

本项目针对使用配合饲料养殖大口黑鲈普遍出现脂肪肝的现象，选择以氧化鱼油中过氧化产物对肝细胞的影响为重要切入点（已有的研究大多是从营养素过量或缺乏的角度考虑），采用组织学和显微结构分析、荧光探针及荧光偏振技术和凝胶电泳等现代生物学技术，阐明氧化鱼油导致大口黑鲈脂肪肝发生的具体过程，同时对肝细胞进行体外培养，在整体、器官、细胞和细胞器多个层次（in vivo和in vitro），对大口黑鲈肝脏脂质代谢障碍进行深入研究，探讨氧化鱼油导致大口黑鲈脂肪肝发生的机理。在此基础上通过在体和离体的方法，研究外源性抗氧化营养素对氧化鱼油导致大口黑鲈脂肪肝发生的控制作用。研究结果对于了解鱼类非营养性脂肪肝的形成机理，充实鱼类营养生理学内容具有重要的理论意义，在实践中可为大口黑鲈配合饲料的研制提供科学依据。

本项目通过在饲料中添加不同过氧化值的鱼油，评定了氧化鱼油对大口黑鲈幼鱼生长、饲料利用、血液参数、肝脏抗氧化防御、肝细胞膜流动性以及肝组织切片的影响。通过在氧化鱼油饲料中添加高剂量维生素预混料、肌醇、维生素C、维生素E和亚硒酸钠，评定了这些抗氧化添加剂对氧化鱼油导致大口黑鲈健康损害作用的保护机制。同时，本项目还通过系列体外细胞培养实验，优化了大口黑鲈的原代肝细胞培养条件，鉴定了脂质过氧化典型终产物丙二醛对原代培养大口黑鲈肝细胞的细胞活力、肝细胞抗氧化机能以及细胞凋亡等的细胞毒性作用。在此基础上，通过在培养基中添加维生素E、维生素C以及亚硒酸钠对原代肝细胞进行预处理，研究了这些潜在抗氧化剂对于丙二醛导致的细胞毒性作用的保护机制。研究结果表明，大口黑鲈并不具备辨别新鲜和氧化鱼油的能力，饲料中添加过氧化值超过约130meq/kg的氧化鱼油会导致大口黑鲈出现鳍条充血症状，过氧化值超过277meq/kg的氧化鱼油还会导致骨骼畸形症状，氧化鱼油会刺激大口黑鲈鱼肝脏抗氧化酶活性升高、消耗肝脏还原性物质和破环肝细胞正常形态结构。添加肌醇、维生素C、维生素E和硒等抗氧化剂并不能提高摄食氧化鱼油的大口黑鲈幼鱼的生长及饲料利用，但能改善其机体过氧化状态和还原性物质储备，有利于机体健康。当培养基中丙二醛浓度大于250μM时，原代培养大口黑鲈肝细胞的细胞活力下降，肝细胞抗氧化酶活性下降，乳酸脱氢酶活性和硫代巴比妥酸反应物质含量增加，活性氧生成从而导致细胞凋亡。维生素C和维生素E的预处理能缓解上述丙二醛对于大口黑鲈原代培养肝细胞的细胞毒性作用，而仅低浓度的亚硒酸钠预处理(25 μM)能部分缓解丙二醛所导致的细胞毒害作用,高浓度的亚硒酸钠可能本身亦会导致细胞凋亡.