LncRNA介导肿瘤相关巨噬细胞促进乳腺癌转移分子机制研究

Tumor-associated macrophages (TAMs) promote breast cancer metastasis. Our previous studies suggested that CCL18 from TAMs influenced breast cancer progression and metastasis, and showed that inhibition of CCL18 with anti-CCL18 antibody or CCL18-siRNA remarkably reduced cancer metastasis. Long noncoding RNA (lncRNA) is associated with tumor metastasis. However, the relationship between TAMs and lncRNA remains unclear. We used microarray analysis to compare lncRNA expression levels between CCL18 treated and untreated breast cancer cell lines. We found that 18 upregulated lncRNAs were enriched in both MCF-7 and BT-474 cell lines. We identified the lncRNA TCONS_00009927 was significantly upregulated in high metastasis potential breast cancer cell lines, but relative molecular mechanism still remains to be clarified. We make a hypothesis that lncRNA TCONS_00009927 acts as a key role in the TAM-mediated invasion-metastasis cascade.The aim is to further define the role of lncRNA TCONS_00009927 in human breast cancer using qRT-PCR, Western blot etc, explore target genes, and provide some effective targets for anti-metastasis therapies.

肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）在乳腺癌转移过程中发挥重要作用。前期研究提示TAMs通过分泌CCL18影响乳腺癌的发展和转移，干扰CCL18的表达可显著抑制乳腺癌细胞转移。长链非编码RNA（lncRNA）与肿瘤侵袭转移密切相关。但lncRNA在TAMs促进乳腺癌转移过程中的作用及其分子机制尚未明确。预实验中发现，CCL18作用后的不同乳腺癌细胞中lncRNA表达谱发生显著变化， lncRNA TCONS_00009927在高转移乳腺癌细胞株中高表达，抑制其表达降低乳腺癌细胞侵袭能力，但其分子机制有待阐明。我们假设TAMs调控乳腺癌转移过程中lncRNA TCONS_00009927起着重要作用。本课题利用qRT-PCR、Western blot等进一步探讨lncRNA在介导TAMs促进乳腺癌转移过程中的地位和寻找其下游靶基因，为靶向肿瘤微环境抑制乳腺癌转移寻找新靶点。

肿瘤相关巨噬细胞（TAM）是乳腺癌肿瘤微环境中数量最多的炎症免疫细胞，是连接炎症和肿瘤途径的关键组成部分。LncRNA与肿瘤生长和转移关系密切。然而，肿瘤微环境中lncRNA对肿瘤转移的作用尚不明确。探讨肿瘤微环境中lncRNA对乳腺癌转移特性的分子调控机制，寻找靶向肿瘤微环境的新方法具有重要意义。本课题主要是通过CCL18刺激筛选出的lncRNA，通过对lncRNA的功能及作用机制的研究，阐明lncRNA在TAM促进乳腺癌转移中的作用机制。主要内容有：1.观察TAM分泌CCL18对人乳腺癌细胞lncRNA 01016表达的影响。2.观察lncRNA 01016对人乳腺癌细胞增殖、凋亡、侵袭、及转移能力的影响。3.确定lncRNA01016互作蛋白及相关信号通路。4. 乳腺癌动物模型验证lncRNA 01016通过该结合蛋白作用促进肿瘤转移。5.乳腺癌临床样本确定lncRNA01016的作为乳腺癌预后及预测转移的临床意义。研究发现，lncRNA01016在乳腺癌中高表达，且与淋巴结转移有关；体外实验显示，利用siRNA敲降lnc01016的表达，可以抑制乳腺肿瘤细胞的增殖、促进其从S期比例细胞减少，抑制乳腺癌转移；机制方面，通过生物信息分析发现lncRNA受雌二醇诱导，敲降lncRNA后ERa的mRNA和蛋白水平均下降，说明lncRNA可能在mRNA和蛋白水平同时调控ERa表达。此外，RNA-seq结果显示，敲降lncRNA后有大量基因表达发生改变。聚类分析方发现，敲降lncRNA后显著影响细胞因子相关通路以及细胞生长通路。KEGG信号分析发现，lncRNA能影响NFKB和ER信号通路的调控，进一步证实lncRNA可以减少NFκB和ER的表达，这为乳腺肿瘤转移研究提供了理论依据。