逆转录病毒介导的wilson病体外转基因成纤维细胞株建立

应用反转录PCR法从3个人胎肝细胞中获取肝豆状核变性基因cDNA表达片段WC1。该表达片段为3.4Kb，经测序分析与报道的WD基因cDNA序列一致。以逆转录病毒Pzip为载体，我们构建了Pzip-WC1基因重组体，酶切位点为SalI切点。将重组体感染5例肝豆状核变性患者及杂合子离体培养的肝细胞中，获得较高表达的反义RNA，采用Western -blot蛋白印迹法和ATP酶检测法，检测了肝豆状核变性患者及杂合子离体培养肝细胞中的WD基因表达情况和其产物P型ATP酶活性的变化，初步揭示了WD的分子发病机制，对肝豆状核变性的基因治疗有一定的临床价值。