细胞内运输途径中两类蛋白重塑细胞膜的分子机制研究

Membrane remodeling is critical for many aspects of cellular function, including the biogenesis of organelles and transport carriers, cell motility, and cytokinesis. Two of the best characterized protein families that participate in membrane remodeling are ADP-ribosylation factor (Arf) of small G protein and sorting nexin (SNX) containing the Bin-Amphiphysin-Rvs (BAR) domain. Arfs and SNXs regulate membrane traffic and dynamics，such as modulating membrane lipid composition，defining tubular endosomal network, organizing trafficking between endosome and Golgi, Golgi and ER, endocytic and recycling pathways. So we aim to study the three dimensional structures of complexes of Arf1/Arf6 and SNX1/SNX9 with membrane lipids by Cryo-EM, to elucidate the molecular mechanism of membrane remodeling in which how to assemble on the membrane surface and which residues play key roles in membrane remodeling, and to investigate their functional mechanism in intracellular transport pathway.

细胞膜重塑分子机制研究是科学家积极探索的问题,它对细胞器的生物发生、物质运输、细胞运动和胞质分裂等多项生理功能是非常重要的。细胞内运输途径中小G蛋白ADP-ribosylation factor（Arf）和含有BAR结构域的sorting nexin（SNX）蛋白质家族被认为是重塑细胞膜的两类重要蛋白分子。Arfs蛋白和SNXs蛋白与细胞膜系统的动态变化息息相关，对细胞膜磷脂成分变化、细胞内体亚结构域形态的维持、内体到高尔基的运输、高尔基体到内质网的运输以及内吞再循环等过程至关重要。本项目将以Arfs和SNXs作为研究对象, 重点关注Arf1/Arf6和SNX1/SNX9，拟利用低温电镜技术解析它们与细胞膜脂类复合物的三维结构，研究它们重塑细胞膜的分子机制，揭示它们如何在细胞膜表面组装，哪些关键位点可能影响细胞膜的重塑，进而深入探讨它们在细胞内运输途径中的作用机制。

细胞膜的重塑对细胞器的生物发生、物质运输、细胞运动和胞质分裂等多项生理功能是非常重要的。本项目综合运用冷冻电镜、生物化学及细胞生物学技术，研究了囊泡运输蛋白SNX1和Arf6重塑细胞膜复合体的三维结构与功能。主要成果包括：1）SNX1与细胞膜重塑复合体的电镜三维结构揭示了SNX1重塑细胞膜变形的分子机理：主要通过PX结构域和一段双性螺旋与细胞膜结合，通过BAR结构域和PX结构域在细胞膜上形成螺旋组装体，同时揭示了Retromer-SNX衣被复合体的组装过程。该成果于2021年1月被PNAS接收。2）解析了小G蛋白Arf6与细胞膜重塑复合体的近原子分辨率（3.9埃）的冷冻电镜结构，Arf6通过N端的肉豆蔻酰化的双性螺旋与细胞膜结合，通过疏水相互作用形成螺旋结构的基本组成单元四聚体，进而四聚体之间相互作用在细胞膜上形成螺旋组装体。