青光安Ⅱ号方对慢性高眼压大鼠视网膜神经节细胞压力敏感离子通道受体蛋白的影响研究

Glaucoma is an irreversible optic neuropathy and the second leading cause of blindness worldwide. High intraocular pressure (IOP) is the main risk factor for glaucoma and can cause optic nerve injury. There is no effective treatment for this injury at home and abroad. Effective treatment drugs are urgently needed. Chinese medicine has broad prospects in this field, and has great potential to discover new compound prescriptions. Chinese medicine believes that the pathogenesis of optic nerve injury is liver and kidney deficiency, Qi deficiency and blood stasis. Based on the treatment of nourishing liver and kidney, invigorating qi and activating blood circulation, we created Qingguang An II prescription. Previous experimental studies have confirmed that Qingguang An II prescription has protective effect on chronic ocular hypertension optic nerve injury, but its specific mechanism is still unclear. Some studies have shown that there are mechanical stress receptors on the surface of retinal ganglion cell membrane and ion channel receptors as corresponding mechanical stress receptors and effectors, which are related to retinal ganglion cell apoptosis. In this study, we observed the effect of this prescription on pressure-sensitive ion channel receptors in retinal ganglion cells of rats with chronic ocular hypertension, and explored the molecular and cytological mechanism of its anti-chronic ocular hypertension optic nerve injury, so as to provide experimental basis for the treatment of this disease by traditional Chinese medicine.

青光眼是一种不可逆的视神经病变，在全球范围内是引起失明的第二大原因。高眼压是青光眼疾病的主要危险因素，可引起视神经损伤，对于该种损伤国内外尚无有效治疗方法，亟需有效治疗药物出现。中医药在该领域拥有广阔的前景，有发现新复方的巨大潜力。中医认为该视神经损伤的病机在于肝肾亏虚，气虚血瘀。基于滋补肝肾，益气活血的治法，我们创制了青光安Ⅱ号方。前期实验研究已证实，青光安Ⅱ号方对慢性高眼压视神经损伤有保护作用，但其具体作用机制尚不明确。有研究显示视网膜神经节细胞膜表面有机械应力感受受体及作为相应的机械应力感受器及效应器的离子通道受体与视网膜神经节细胞凋亡有关。本研究观察该方对慢性高眼压大鼠视网膜神经节细胞压力敏感离子通道受体的影响，探讨其抗慢性高眼压视神经损伤的分子细胞学机制，为中医治疗本病提供实验依据。

青光眼是一种退行性视神经病变，也是全球首位不可逆性致盲眼病，视神经病变治疗难度大，效果差，一直是眼科的研究重点、热点及难点。现有的青光眼视神经保护手段，疗效并不令人满意。有各种天然药物资源的中医药在青光眼治疗上具独特优势，越来越多的研究显示，中药能起到很好的视神经保护作用，甚至可能挽救部分濒临死亡的视神经细胞，从而扩大视野，提高患者的视觉功能。课题组在前期临床经验的基础上，根据青光眼视神经损伤的基本中医病机气阴亏虚、脉络瘀滞。研发了以滋补肝肾、益气活血为治法的青光安Ⅱ号方，在临床取得了一定疗效，同时也申请了国家发明专利。但是该方具体机制如何，尚未进行深入研究。为此我们又开展了一系列的机制研究。首先通过动物实验，验证了青光安Ⅱ号方对青光眼模型小鼠视神经具有保护作用，且对视网膜上压力敏感的参与高眼压所致的视网膜神经节细胞凋亡的TRAAK及TRPV4蛋白有影响。中药复方具有多成分多靶点的特点。而后通过网络药理学筛选青光安Ⅱ号方的有效活性成分、治疗青光眼的主要靶点以及信号通路，并在此基础上进行分子对接。基于“青光安Ⅱ号方治疗青光眼关键靶点”和“分子对接”结果，选择IL6和IL1β蛋白进行细胞实验验证。通过转录组学研究在青光安Ⅱ号方对青光眼小鼠的视网膜效应过程中的可能作用的转录位点及信号通路。在动物实验过程中，发现青光安Ⅱ号方可能是通过抑制Rho/ROCK信号通路而降低了视网膜神经节细胞中Caspase-3的转录，激活了Bcl-2的表达，从而减弱了RGCs的凋亡。现有的中药是通过灌胃的方式给药，药物进入肠道后会对肠道微生物造成影响，为此我们也初步检测了青光安Ⅱ号方对青光眼小鼠肠道菌群的影响，发现青光安Ⅱ号方会对模型小鼠乳酸杆菌、双歧杆菌及链球菌产生明显影响，但青光安Ⅱ号方影响肠道菌群以后这些菌的改变和视神经保护效应之间的关联的具体机制还需要在以后的研究过程中进一步深入探索。